基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

产品说明

DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。 缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>5×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）