HPI:试剂盒组分详细描述：

1、 Hypoxyprobe-1

Hypoxyprobe-1是2-硝基咪唑的替代物，其化学名和一成分是Pimonidazole hydrochloride（Pimonidazole HCl，派诺硝唑），分子量为290.8，水溶性为400mM（=116 mg/ml），紫外吸收（324nm）的吸光系数为7020（0.9%生理盐水）。 Hypoxyprobe-1的粉末和溶液形式皆具化学稳定性。比如，固体形式的Hypoxyprobe-1于柔弱光线下室温保存2年，UV和HPLC分析法评估无任何降解发生。溶于0.9%生理盐水的Hypoxyprobe-1，浓度100g/L置于2-8℃保存4.5年，UV和HPLC分析法评估无任何降解发生。

2、 MAb1抗体
MAb1抗体是抗派诺硝唑探针的大鼠IgG1单克隆抗体（克隆11.23.22.R），浓度为60ug/ml（in PBS）。可用免疫组化检测（IHC），冰冻切片或者福尔马林固定的石蜡包埋切片；也可组织降解后用流式分析法检测；

使用指南：

1.Animal Studies 动物研究

研究正常或肿瘤组织缺氧首先通过静脉注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法给Hypoxyprobe-1溶液，剂量为60mg/kg体重。比如，25g小鼠的探针用量为1.5mg/只小鼠。（高达400mg/kg的剂量用于小鼠无可见毒性或引起组织缺氧变化，但60mg/kg以低成本给予良好的染色结果）。
给药后，Hypoxyprobe-1分布到包括大脑的所有组织，且仅仅在氧浓度≤14μM（相当于pO2=10mm Hg，37℃）的细胞内与蛋白质巯基形成复合物。除了肿瘤之外，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤含pO2等于或低于10mm Hg的细胞，也会结合Hypoxyprobe-1。

2、Tissue cultures 组织培养
通常情况下，细胞悬液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧环境中孵育1-2h。之后细胞离心涂片、固定、抗体染色。

常见问题解答（FAO）：

※Hypoxyprobe-1 探针如何溶解？

Pimonidazole HCl 是弱碱性盐酸盐，水溶性非常好，建议溶解于116mg/ml 的中性生理盐水。

※Pimonidazole HCl免疫剂量是多少？

对于常规的小动物大小比较均一的，例如：小鼠或大鼠，我们推荐：探针用量：60 mg/kg。从30 mg/kg 到 400 mg/kg在小鼠和大鼠都有用到，在此范围内的探针用量，不会由于血流效应而导致毒性或氧量的改变。对于体型较大个体，注射剂量依据个体的基础表面积而定。对于人样本，推荐剂量为：0.5 mg/m2，狗样本：0.28 mg/m2
※  Pimonidazole HCl 探针是否能够渗透进入低氧大脑组织或脑肿瘤组织？

 Pimonidazole HCl可以自由渗透进入脑和脑肿瘤组织。

※探针注射后，多久可以进行收获组织？

对于人体组织的一些研究表明，收获组织需要在免疫后15-24小时后检查。探针在血浆中的半衰期是5小时，因此16-24小时相当于3-5个探针半衰期循环。也就是说：在组织检查时：大概有1/8 到1/32 的探针仍存在，冷固定后，这样减少了非特异性染色，且低背景。
另外关于人类肿瘤研究表明，活组织检查应该在免疫后，1.5-4小时，然后组织及时转到液氮固定。这种方法背景也较低。小鼠血浆中的探针半衰期在0.25小时。这种情况下，采取1-2小时收获组织然后采取快速固定方法，可有效的消除背景。