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产品介绍
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是MTT,XTT等的替代方法,一种基于WST-8(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的Formazan。对于同样的细胞,颜色的深浅(生成的Formazan量)和细胞数目呈线性关系。可用于药物筛选、细胞增殖和毒性测定、肿瘤药敏等试验。
操作步骤
一. 制作标准曲线(测定细胞具体数量)
1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞;
2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做4-7个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔;
3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加入CCK-8试剂(按每100 μL培养基加10μL CCK-8)培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标,OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。(使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致)
二. 细胞活性检测
1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养一段时间;
2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡,它们会影响OD值的读数);
3.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时;
4.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
三.细胞增殖-毒性检测
1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养24小时;
2.向培养板加入不同浓度的待测药物;
3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间;
4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡);
5.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时;
6.用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
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