产品描述

TranscriptMax T7 High Yield RNA Synthesis Kit 是基于 T7 RNA 聚合酶的高效 RNA 体外转录试剂盒。该试剂盒中含有 T7 RNA 聚合酶、反应缓冲液、核苷酸混合液等经过优化的试剂，可以将含有 T7 启动子的 DNA 模板高效转录成 RNA。本试剂盒可应用于制备 guide RNA、RNA 标准品等。

产品组分

a. Positive Control Template 是阳性对照，可作为转录模板使用，用来测试体外转录体系的反应效率。在 37℃孵育30 min 条件下，对照转录反应体系生成的转录 RNA 产量≥50 μg，其产量在纯化后由 NanoDrop 测定。

保存条件

-20℃保存，有效期 1 年。

实验流程

1.T7 RNA 转录原理示意图

T7 RNA 转录原理示意图如图 1 所示。

2.DNA 转录模板类型

2.1 质粒模板

带有 T7 启动子的质粒可以作为转录模板，但是质粒必须要线性化，可通过限制性核酸内切酶或 PCR 扩增的方法将质粒线性化。质粒线性化后，将纯化后的产物作为模板，每个反应体系建议加入 1 μg 的线性化质粒作为模板进行体外转录。

2.2 PCR 产物模板

带有 T7 启动子的 PCR 产物可以作为转录模板。需要通过电泳确定 PCR 产物的特异性和浓度，一般在 20 μL 的体外转录体系中加入 2-5 μL 的 PCR 产物作为模板。

2.3 合成的DNA模板

带有 T7 启动子的合成 DNA 片段可以作为转录模板。一般将合成的 T7 oligo 和 T7 oligo 反向互补的模板链退火后作为模板，每个反应体系建议加入 0.25 μM-1 μM 的退火产物作为模板。

3.体外转录反应

3.1 按下表试剂的顺序进行反应体系的配制。

· 请将试剂解冻并完全混匀后再使用。
· 5 × TranscriptMax Reaction Buffer 中含有亚精胺，而亚精胺与核酸容易形成复合体沉淀，DNA 转录模板尽量最后加入到体系中。
· 上述反应体系的总体积为 20 μL，可适当等比例调整反应体系。

3.2 将上述试剂充分混匀，然后短暂离心，在 37°C下孵育 2-4 h 进行体外转录，延长转录时间可提高转录产量，如果转录产物用于 CRISPR 一步法（一管法）检测，推荐过夜转录 12-16 h。

3.3 37℃孵育结束后，后续进行转录产物的纯化推荐使用 Tolo RNAclean Kit (#36201) ，该试剂盒具有彻底去除 DNA 模板残留，操作简便等特点。

注意事项

1.使用质粒作为转录模板时，质粒必须要进行线性化处理，否则转录产物会出现长度大小不一的情况。

2.转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。例如模板DNA 中混入RNase、EDTA、NaCl等高盐溶液均可显著抑制体外转录反应，导致 RNA 合成量减少。

3. 体外转录过程中使用DNaseⅠ消化DNA模板后可能会存在微量残留，需要将纯化后的RNA于70℃处理10min，以灭活残留的DNaseⅠ。

4.实验过程应选用无核酸酶的枪头和离心管。

5.本产品仅供科研使用。