产品详情页-TOLOBIO/吐露港

产品概述

产品描述

HOLMES ssRNA reporter (FAM)是单链RNA寡核苷酸探针，5′端标记FAM荧光报告基团（Reporter），3′端标记荧光淬灭基团(Quencher)。当HOLMES ssRNA reporter探针完整时，报告基团发射的荧光信号会被淬灭基团淬灭。而当HOLMES ssRNA reporter探针被切断后，5'端的FAM荧光报告基团和淬灭基团分离，从而发出可被检测的荧光信号。常见的Cas13酶在与guide RNA、target RNA组成三元复合物后，都会被激发出针对ssRNA的反式剪切活性(或称为旁路切割活性)，将HOLMES ssRNA reporter探针切碎，并发出荧光信号。
HOLMES ssRNA reporter (FAM)探针经过特别的序列优化，对Cas13反式切割活性高度敏感，可作为Cas13家族蛋白反式切割反应的报告探针，广泛用于CRISPR诊断反应体系以便对靶标核酸进行快速检测。

实验流程

1.反式剪切实验体系

组分	体积	终浓度
10 × HOLMES Buffer for Cas13	2 μL	1 ×
10 µM Cas13 Nuclease	0.05~0.5 μL	25~250 nM
10 µM guide RNA	0.05~0.5 μL	25~250 nM
10 µM Target RNA	0.05~0.5 μL	25~250 nM
10 µM HOLMES ssRNA reporter	0.05~0.5 μL	25~250 nM
Nuclease-free water	Up to 20 μL

◆ 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
◆ 建议使用低吸附的离心管、吸头等耗材；
◆ 反式剪切体系中探针的用量和预期反应到达平台期的时间可参考各批号Cas酶transU的具体数值，详见本公司提供的COA检测报告。
实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，每30 sec采集一次荧光信号，反应温度根据不同的Cas13酶最适温度进行设定。

产品组分

组分	31111
HOLMES ssRNA reporter (FAM) a	1 OD

a.HOLMES ssRNA reporter (FAM)总量为1 OD (约为9.29 nmol)，为干粉状态。使用前请先短暂离心，然后加入92.9 µL DNase/RNase-Free Water溶解，得到浓度为100 µM的贮存液，在无反复冻融的条件下可于-80℃避光保存6～12个月。使用前再将贮存液用DNase/RNase-Free Water稀释成10 µM的工作液，按下表推荐的浓度加入CRISPR剪切反应体系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6个月内使用。

保存条件

-80℃避光储存；≦4℃运输。

组分	体积	终浓度
10 × HOLMES Buffer for Cas13	2 μL	1 ×
10 µM Cas13 Nuclease	0.05~0.5 μL	25~250 nM
10 µM guide RNA	0.05~0.5 μL	25~250 nM
10 µM Target RNA	0.05~0.5 μL	25~250 nM
10 µM HOLMES ssRNA reporter	0.05~0.5 μL	25~250 nM
Nuclease-free water	Up to 20 μL

◆ 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
◆ 建议使用低吸附的离心管、吸头等耗材；
◆ 反式剪切体系中探针的用量和预期反应到达平台期的时间可参考各批号Cas酶transU的具体数值，详见本公司提供的COA检测报告。
实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，每30 sec采集一次荧光信号，反应温度根据不同的Cas13酶最适温度进行设定。

好评度 0%