产品描述

LbuCas13a 核酸酶(又名 C2c2)是依赖于 crRNA 介导的 RNA 内切核酸酶，来源于 Leptotrichia buccalis菌株。在靶标单链 RNA 存在 PFS 序列的情况下，可特异地识别并剪切靶标 RNA。此外，Cas13a 也具有反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性)，即当 LbuCas13a 蛋白与 crRNA、靶标 RNA 结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列单链 RNA 的反式剪切活性，将体系中的任意序列单链 RNA 切碎。该活性也被用于靶标核酸的快速检测试剂盒的开发。例如，Broad 研究所的张锋团队便利用 Cas13a 蛋白开发了名为“SHERLOCK”的下一代分子诊断系统(详细信息请参考 PMID: 28408723) 。

产品组分

a.LbuCas13a Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL；
 

保存条件

组分-20℃储存；≤ 0℃运输。

活性定义

在总体积为 20 μL 的 1 × HOLMES Buffer for Cas13a [pH 7.6]反应体系中，37℃反应条件下，1 min内剪切 1 pmol ssRNA 探针所需的 Cas13a 酶量定义为 1 transU。

实验流程

1.反式剪切实验

· 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，LbuCas13a Nuclease 可用 1 × HOLMES Buffer for Cas13a 稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的 Cas13 酶长期保存，请使用 Cas13 Dilution Buffer，#32013），crRNA、Target RNA 及 ssRNA Reporter 可用 Nuclease-free Water 稀释，但极低浓度的Target RNA（例如 LOD 实验）建议用 0.1% Tween 20 稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。

· 实时荧光定量 PCR 仪检测荧光信号，37℃反应，每 30 sec 采集一次荧光信号。

实验结果

Fig 1. Results of Cas13 collarteral cleavage at different concentrations of target RNA.

注意事项

1. Cas13a 的顺式剪切(cis-cleavage): Cas13a 在 crRNA 的引导下，特异性地剪切 target RNA，且对 target RNA的 PFS 序列要求并不严格。

2. Cas13a 的反式剪切(trans-cleavage): 当 target RNA 存在时，Cas13a/crRNA 与 target RNA 形成三元复合物(Cas13a/crRNA/target RNA)，同时，Cas13a 被激发反式剪切活性，将反应体系中任意序列的单链 RNA切碎。

3. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

4. Cas13a 蛋白对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20℃保存。

5. 本公司提供的 Cas13a 蛋白及反应缓冲液不含除 Cas13a 外的任何其它核酸酶活性。

6. 本产品仅供科研使用。