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产品概述
产品描述
SuCas12a2核酸酶来源于Sulfuricurvum sp. PC08-66菌株。Cas12a2是由crRNA介导的RNA内切核酸酶，其crRNA的直接重复序列(Direct Repeat，DR)与Cas12a基本一致，Cas12a2在靶标单链RNA存在PFS序列的情况下，可特异地识别并剪切靶标单链RNA。此外，相比于其他Cas核酸酶在被特异靶标激活后仅非特异性地降解ssDNA(例如Cas12a、Cas12b)，或ssRNA(例如Cas13a)，或ssRNA和ssDNA(例如Cas12g)，Cas12a2具有更加强大的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性)，即当Cas12a2酶与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列ssDNA、ssRNA和dsDNA的反式剪切活性，将体系中的任意序列ssDNA、ssRNA和dsDNA切碎。
产品组分
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组分 |
32122-01 (100 pmol) |
32122-03 (1,000 pmol) |
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100 pmol |
1,000 pmol |
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1 mL |
1 mL |
SuCas12a2 Nuclease (10 μM) 
10a.SuCas12a2 Nuclease 浓度为 10 μM，即 10 pmol/μL，100 pmol 规格的总体积为 10 μL，1,000 pmol 规格的总体积为 100 μL。
保存条件
-20℃储存；≤ 0℃运输。
实验流程
1.反式剪切实验(以反式切割 ssRNA 为例)
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组分 |
体积 |
终浓度 |
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10 × HOLMES Buffer for Cas12a |
2 μL | 1 × |
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10 μM SuCas12a2 Nuclease |
0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
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10 μM crRNA |
0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
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1 μM Target DNA |
0.5~5 μL | 25~250 nM |
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10 μM ssRNA Reporter |
0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
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Nuclease-free water |
Up to 20 μL |
◆ 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，SuCas12a2 Nuclease 可用 1 × HOLMES Buffer for Cas12a 稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的 Cas12 酶长期保存，请使用 Cas12 Dilution Buffer，#32012），crRNA、Target RNA 及 ssRNA Reporter 可用 Nuclease-free Water 稀释，但极低浓度的 Target RNA（例如 LOD 实验）建议用 0.1% Tween 20 稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。
◆ 实时荧光定量 PCR 仪检测荧光信号，37°C反应，每 30 sec 采集一次荧光信号。
实验结果
常见问题解答