产品描述

SpCas9来源于 S. pyogenes 菌株，是依赖于crRNA和tracrRNA(或连接后形成的sgRNA)引导的 DNA 内切核酸酶，在靶标双链DNA存在 PAM(NGG)的情况下，特异地切割靶标双链DNA，使DNA双链断裂 并生成平末端。PAM 对于 SpCas9 的识别和切割都是必需的，其切割位点位于目标序列(target sequence)内，离PAM区3个碱基。SpCas9 酶的HNH和RuvC结构域分别负责切割靶标双链DNA中与sgRNA配对和非配对的链。本产品中，SpCas9的H840被突变为A，从而使其HNH结构域失活。因此，SpCas9 H840A Nickase只有RuvC结构域有剪切活性，仅剪切靶标dsDNA中的NTS链，形成单链缺刻。

产品优势

✽ 高纯度
✽ 高灵敏度
✽ 高特异性

产品组分

a.SpCas9 H840A Nickase浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL；

保存条件

-20℃储存；≤ 0℃运输。

实验流程

1.SpCas9 H840A Nickase 剪切实验

◆ SpCas9 H840A Nickase 可在 sgRNA 引导下顺式剪切带有靶位点的超螺旋 DNA(cccDNA), 37°C反应 30 min，产生切刻后的开环 DNA，然后 85°C加热 5 min 灭活。开环 DNA(Nicked, ocDNA)会比原本的超螺旋DNA(cccDNA)电泳迁移速率更慢，因此，可通过琼脂糖凝胶电泳检测 SpCas9 H840A Nickase 对靶标的顺式剪切。