pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo是碧云天研发的以毕赤酵母(Pichia pastoris)为表达菌株，表达C端带有His标签的目的蛋白的真核表达质粒。在多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，就可以表达C端带有His标签的目的蛋白。

毕赤酵母作为蛋白真核表达系统有很多优势：易于操作，蛋白正确折叠以及翻译后修饰等。与昆虫表达系统和哺乳动物细胞表达系统相比，它快速、高效且经济，通常外源蛋白还具有较高的表达水平。与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)相比，其外源蛋白表达水平往往高10-100倍；它们均能进行分泌蛋白的N-连接糖苷键修饰，表达分泌蛋白进行糖基化修饰时糖链长度是有差别的，毕赤酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是8-14甘露糖残基(Mannose residue)，而酿酒酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是50-150个甘露糖残基；毕赤酵母很少对分泌蛋白进行O-连接糖苷键的修饰。

本质粒转化X-33, SMD1168H或GS115菌株后，因为宿主菌有功能完好的组氨酸脱氢酶基因，适合进行Zeocin筛选转化子，并能使目的基因在甲醇诱导后实现高水平表达。常用的毕赤酵母宿主菌GS115 (D0412)和KM71 (D0413)，二者的组氨酸脱氢酶基因(his4)发生突变，阻止它们合成组氨酸，因此具有His4^-营养缺陷标记，适合在组氨酸缺少的培养基进行转化子筛选。GS115/X-33/ SMD1168H菌株具有功能完整的AOX1基因，属于Mut⁺ (Methanol utilization plus)表型，即甲醇利用正常，在甲醇诱导的情况下生产快速。KM71/KM71H菌株的AOX1位点被ARG4基因插入破坏，表型为Mut^s (Methanol utilization slow)，即甲醇利用缓慢，在甲醇诱导的情况下生产缓慢。

本质粒5'端含有醇氧化酶基因AOX1启动子，可以高效启动目的基因的毕赤酵母胞内表达。在毕赤酵母中，AOX1启动子属于甲醇诱导型强启动子，其严格依赖于甲醇的诱导，并受葡萄糖、果糖、甘油、乙醇等碳源的抑制，因此可通过控制葡萄糖、甘油等碳源的消耗和甲醇的流加来调控AOX1启动子的表达。

本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和博来霉素(Zeocin)双抗性。大肠杆菌博来霉素筛选推荐浓度为25-50μg/ml (低盐LB培养基，NaCl浓度不能超过5g/L)，酵母筛选推荐浓度为50-300μg/ml (YPD或基本培养基)。氨苄青霉素通常配制成100mg/ml的储备液，使用时可以按照1:1000的比例稀释使用，即推荐使用浓度为100μg/ml。

pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo质粒(4231bp)的图谱如下：

pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo质粒的主要信息如下：

pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2883 pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo.pdf

pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo中没有的酶切位点包括：

pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo的单酶切位点包括：

pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo质粒可使用的测序引物序列如下：

5' AOX1 sequencing primer (855-875): 5'-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3'

3' AOX1 sequencing primer (1095-1115): 5'-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3'

pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo的全序列信息:D2883 pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo 全序列.txt

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本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。