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生物试剂
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商家描述
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本产品由AH109菌株开发而来，适用于GAL4酵母双杂系统，MATa型，可直接用于杂交筛库。其MATa型菌株由PJ69-2A酵母菌株衍生，通过引入lacZ报告基因至PJ69-2A而获得AH109。此菌可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187进行杂交操作，用于蛋白质互作验证或库筛选。其转化标记物为trp1和leu2，报告基因为lacZ、HIS3、ADE2和MEL1。AH109-GAL4酵母双杂系统中，需要配套使用两种质粒：pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD（来自酵母转录因子GAL4N端1~174位氨基酸)与目标蛋白（Bait）的融合蛋白；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD（GAL4 C端768~881位氨基酸）与目标蛋白（Prey）的融合蛋白。四个报告基因（lacZ、HIS3、ADE2和MEL1）由三种不同的启动子（GAL1、GAL2和MEL1）启动，这些启动子仅具有17 bp的核心区由GAL4识别，其余部分均不相同，这大大降低了酵母双杂法假阳性的概率。本产品经优化的感受态制备工艺制备而成，在-80℃下可保存1年，使用pGADT7质粒DNA检测，转化效率可达1×10^4 cfu/µg。