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T7 Express lysY Electroporation-Competent Cell
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  • 货号 EL022-H-S
  • 品牌 睿必特 ( 经销商 )
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  • 规格/包装 5×50μL
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产品简介:


品牌:睿比特
货号:EL022H-S
名称:T7 Express lysY(电转)
规格:5×50 μL
html:

使用说明

² 产品简介

本品为大肠杆菌T7 Express lysY (基因型:MiniF lysY (CamR)/fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 (mcrC-mrr)114::IS10制作的电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。T7 Express lysYBL21菌株的衍生菌株,广泛用于蛋白的原核表达实验。T7 Express lysYLonOmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY菌株对噬菌体T1的抗性。T7 Express lysY菌株含有 lysY质粒( lysY质粒具有氯霉素抗性),lysY质粒含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。染色体整合了T7噬菌体RNA聚合酶,可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEXpMAL等质粒的蛋白表达。可用于高质量文库构建T7 Express lysY电击感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bpAmpR)检测转化效率>2×1010 cfu/μg DNA

 

 

² 产品规格

 

品名

货号 

规格

T7 Express lysY 转化感受态

EL022H-S

50 μL


EL022H-M

10×50 μL

-80℃(12个月)

 

² 转化方法

1.取适量LB37度预热1-2小时(每管感受态准备10mlLB)。

²2. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分,正置5分钟,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。

²3.-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

²4.200 ul枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中(避免产生气泡),轻轻晃动使液面保持水平状态,盖上杯盖,插入冰中。

²5.启动电转仪,根据仪器要求设置参数,将电击杯从冰中拿出,用吸水纸擦拭表面,吸干表面水渍,放入电转槽中,电击完成后拿出电转杯放室温,打开杯盖,15秒内加入100ul预热的LB(此步骤可在电转仪旁操作,无需在超净台操作),用1ml枪吹吸电击杯底部2-3次,混匀后转移到50 ml离心管,向离心管中补加LB培养基至10 ml37℃,220 rpm 复苏60分钟。

²6.5000rpm离心一分钟收菌,留取100-200ul菌液重悬后涂布到含相应抗生素的平板上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养12-16小时。

 

注意事项

²1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10

²2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。

²3. DNA不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。

²4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

²5.若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

²6.对于连接产物,最好用膜纯化或乙醇沉淀法纯化DNA后用适量ddH2OTE缓冲液(10 mM Tris HCl, pH7.5;1 mM EDTA)重悬产物,保证DNA浓度不超过100 ng/ul。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。

²7. 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

²8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。


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品牌介绍:

详情请参考官网:http://www.bio-rabbit.com/Default.aspx/

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