Ar.A4化学转化感受态使用说明

²  产品简介

本品为农杆菌Ar.A4（基因型：Agrobacterium rhizogenes(kanR) Ar A4 Ri(agropine  type)）制作的感受态，发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。经pK7WGF2质粒（11876bp，Spec^R）检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

²  产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

²  转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒（约500 ng），轻弹使混合均匀；

2. 冰中孵育5 min，液氮中放置5 min，放37℃水浴锅中热激5 min，立即插入冰中静置5 min；

3. 添加900 μL YEB液体培养基，28℃摇床220 rpm培养2-3 h；

4. 5000 rpm离心，倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，28℃培养箱放置2-3天。

²  注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 利福平使用浓度<25 μg/ml，庆大霉素使用浓度<50 μg/ml。过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率；Ti质粒丢失概率极低，可不用庆大霉素，以提高转基因效率。

4. Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。