Biorabbit-LBA4404化学转化感受态使用说明

² 产品简介

本品为农杆菌LBA4404（基因型：Ach5 (rif^R) Ti pAL4404 (strep^R) Octopine）制作的感受态，菌株为 Ach5 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移)。pAL4404型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予LBA4404菌株链霉素抗性，适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的LBA4404化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒检（12739bp，KanR）检测转化效率>104cfu/μg DNA。

² 产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

² 转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒（约500 ng），轻弹使混合均匀；

2. 冰中孵育5 min，液氮中放置5 min，放37℃水浴锅中热激5 min，立即插入冰中静置5 min； 

3. 添加900 μL YEB液体培养基，28℃摇床220 rpm培养2-3 h；

4. 5000 rpm离心，倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，28℃培养箱放置2-3天。

² 注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 利福平使用浓度<25 μg/ml，链霉素使用浓度<50 μg/ml。过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率；Ti质粒丢失概率极低，可不用链霉素，以提高转基因效率。