使用说明

一、产品简介

    本品为农杆菌EHA105（基因型：C58 (rif^R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine）制作的感受态，株由EHA101菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的EHA105化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（12739bp，Kan^R）检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

二、产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒（约500 ng），轻弹使混合均匀；

2. 冰中孵育5 min，液氮中放置5 min，放37℃水浴锅中热激5 min，立即插入冰中静置5 min； 

3. 添加900 μL YEB液体培养基，28℃摇床220 rpm培养2-3 h；

4. 5000 rpm离心，倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，28℃培养箱放置2-3天。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 利福平使用浓度<25 μg/ml。过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。