使用说明

一 产品简介

    本品为大肠杆菌T7 Express lysY{基因型：MiniF lysY (Cam^R)/fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--Tet^S)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--Tet^S) endA1 ∆(mcrC-mrr)114::IS10}制作的感受态。该菌种是BL21菌株的衍生菌株，广泛用于蛋白的原核表达。T7 Express lysY是Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株，可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY菌株对噬菌体T1的抗性。T7 Express lysY菌株含有lysY质粒（ lysY质粒具有氯霉素抗性），lysY质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。染色体整合了T7噬菌体RNA聚合酶，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。T7 Express lysY感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>1×10⁸ cfu/μg DNA。

二、产品规格

-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。