使用说明

一、产品简介

    本品为大肠杆菌Tuner(DE3){基因型：F^- ompT hsdSB(r_B^- m_B^- ) gal dcm lacY1 (DE3)}制作的感受态。该菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。此菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如 pET 系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于Tuner的染色体上，所以称为Tuner(DE3)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁷ cfu/μg DNA。

二、产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床200 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃培养箱放置过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。