使用说明

一、产品简介

    本品为大肠杆菌Rosetta 2(DE3)pLysS [基因型：F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm(DE3)pLysSRARE2(Cam^R)]制作的高效感受态。该菌株携带pLysSRARE2质粒，具有氯霉素抗性。pLysSRARE2含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白；pLysSRARE2同时补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平，该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，该区整合于大肠杆菌的染色体上，可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Rosetta2(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，

pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁷ cfu/μg DNA。

二、产品规格

-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床220 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃ 培养箱放置过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。