使用说明

一、产品简介

    本品为大肠杆菌Rosetta 2(DE3) [基因型：F^- ompT hsdSB(r_B^- m_B^-) gal dcm (DE3) pRARE2 (Cam^R)]制作的高效感受态。Rosetta 2(DE3)菌株来源于BL21，是BL21 的衍生菌株，为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入BL21 (DE3)细胞中即是 Rosetta 2(DE3)，pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和 CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达。Rosetta 2(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

二、产品规格

-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。