使用说明

一、产品简介

   本品为大肠杆菌BL21 Star(DE3) {基因型FompT hsdS_B (r_B^- m_B^-) galdcm (DE3)pLysS Cam^R}制作的感受态。OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)两个菌株均起源于BL21(DE3)，其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的区别在于其基因组含有至少一个未知突变，这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白的能力，此突变位点参与大肠杆菌表达毒性蛋白时的细胞死亡途径；OverExpressC43(DE3)来源于OverExpress C41(DE3)，是通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。C43(DE3)菌株具有比C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入 C43(DE3)细胞中即是C43(DE3) pLysS，pLysS表达T7溶菌酶，T7溶菌酶可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3 区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。C43(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>1×10⁸ cfu/μg DNA。

二、产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床200 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃ 培养箱放置过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。