使用说明

一、产品简介

    本品为大肠杆菌B834(DE3)pLysS{基因型：F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^-) gal dcm met (DE3)pLysS (Cam^R) }制作的感受态。该菌种是B834(DE3)的衍生菌株，广泛用于蛋白的原核表达实验。B834(DE3)pLysS是甲硫氨酸营养缺陷型菌株，可用于35 S-methionine标记蛋白的实验或通过硒代甲硫氨酸用于晶体学研究。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，整合于大肠杆菌的染色体上)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。B834(DE3)pLysS 菌株具有氯霉素抗性。B834(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×10⁸ cfu/μg DNA。

二、产品规格

-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床220 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃ 培养箱放置过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。