使用说明

一、产品简介

    本品为大肠杆菌BL21 Star(DE3){基因型：F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm rne131 (DE3)}制作的感受态。BL21 Star(DE3)菌株来源于BL21(DE3)，含有rne131 突变（RNaseE基因），RNaseE基因的突变降低了內源RNase的积累，增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高异源蛋白的表达水平。主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达，同时含有大肠杆菌RNA聚合酶，也可用于非T7启动子表达载体（pGEX，pMAL等）的蛋白表达。由于BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高，所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

二、产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床200 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃ 培养箱放置过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。