基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]

产品说明

JM109菌株来源于E.coli K strain，是提取高质量DNA的理想菌株，recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。携带hsdR17基因型背景，使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqIqZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验。JM109感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. JM109感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）