碧云天的NADP+/NADPH检测试剂盒(WST-8法) (NADP+/NADPH Assay Kit with WST-8)是一种基于WST-8的显色反应，通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中NADP+ (氧化型辅酶II)和NADPH (还原型辅酶II)各自的量、比值和总量的检测试剂盒。 NADP+/NADPH以及NAD+/NADH的传统检测方法是检测NADPH或者NADH在340nm处吸收波长的变化，该方法灵敏度较低并易受样品中有类似紫外吸收物质的干扰，并且在紫外检测过程中通常需要加大检测样品量以弥补NADPH在340nm处吸光度过小的不足，因此该检测方法具有很大的局限性。 WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。 WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。 本试剂盒使用便捷，无需分离纯化细胞、组织或其它样品中的NADP+和NADPH，且特异性检测NADP+和NADPH，而不检测NAD+和NADH。本试剂盒可以检测含量低至0.05μM (2.5pmol)的NADP+或NADPH，在0.05μM (2.5pmol)至6μM (300pmol)之间呈现良好的线性关系。 NADP (Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)是很多氧化还原反应的辅酶，包括NADP+ (氧化型)和NADPH (还原型)两种形式。NADP+也参与到生物合成反应中，比如脂质和核酸的合成。在动物细胞中，戊糖磷酸途径(pentose phosphate pathway，PPP)的氧化阶段是NADPH最主要的来源。 本试剂盒可检测样品中的NADP+、NADPH以及它们的比值，具体原理如下： a. 测定NADP+/NADPH的总量：葡萄糖-6-磷酸(glucose-6-phosphate, G6P)在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PDH)的作用下氧化生成6-磷酸葡萄糖酸内酯(6-phosphogluconate,6-PG)，在这一反应过程中NADP+被还原为NADPH；生成的NADPH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methyl Sulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的formazan，在450nm左右检测有最大吸收峰。反应体系中生成的formazan与样品中总的NADP+/NADPH的总量呈比例关系。WST-8法检测NADP+和NADPH总量的原理参考图1。 b. 单独测定NADPH的量：60℃水浴加热30分钟后，样品中NADP+会分解而只保留NADPH。NADPH将WST-8还原成formazan，通过比色法确定反应生成的formazan的量，最终可以确定样品中NADPH的量。 c. 测定NADP+以及NADP+/NADPH比值：根据前两步检测获得的NADP+和NADPH总量以及NADPH的量，即可得到样品中NADP+的量以及NADP+/NADPH的比值。