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产品概述
NOVA® Alkaline Phosphatase (FAST) 可催化DNA、RNA 和核苷酸5' 端和3' 端磷酸基团的水解,也能够去除蛋白磷酸基团。该酶在NOVA®所有限制酶缓冲液及常用PCR 缓冲液中均保持活性。在37℃的条件下作用10min,该酶即可使所有类型DNA 末端去磷酸化。该酶在75℃条件下处理5 分钟便可失活,因此不需要在连接反应之前去除。
活性定义
在37℃条件下,AP 缓冲液环境中,10 分钟内能将1 μg 线性化pUC57 DNA 的5' 末端去磷酸化所需要的酶量定义为1 个活性单位(U)。
注意事项
1. 结合 Alkaline Phosphatase (FAST) 的 DNA 可能在琼脂糖凝胶中出现条带偏移或弥散。为避免此现象,可在样品中加入混有SDS的6X Loading Buffer,在65℃孵育10 分钟后,冰浴降温再进行电泳。
2. Alkaline Phosphatase (FAST) 在所有 NOVA®限制酶缓冲液中都有活性,可以直接加入到酶切过后的DNA 样品中,没有必要在去磷酸化之前对限制酶进行热失活。
抑制与失活
• 抑制剂:金属螯合剂;
• 失活条件:在75℃下作用5 分钟。
用途 |
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去除DNA片段的5'-末端磷酸基团,阻止其连接。 |