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金属螯合亲和层析，又称固定化金属离子亲和层析（Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC）。该法利用蛋白质表面的某些氨基酸（如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和金属离子（Cu2+、Zn2+、Ni2+等过渡金属离子）发生特殊相互作用的原理，从而实现蛋白质的分离。
高流速琼脂糖金属螯合亲和层析介质（Ni-IDA）是将亚氨基二乙酸（IDA）键合在高流速琼脂糖微球上，并螯合金属离子Ni2+（或其它金属离子）而形成的一种亲和层析介质。影响蛋白质、多肽与金属离子亲和力大小的因素主要是蛋白质表面可结合的氨基酸（种类、数目和分布）、金属离子的种类和密度、层析条件（pH、盐的种类和浓度、添加剂等）。Ni-IDA具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、易于再生、成本较低等优点，广泛用于His标签蛋白等生物分子的分离纯化。
高流速琼脂糖金属螯合亲和层析介质（Ni-IDA）是将亚氨基二乙酸（IDA）键合在高流速琼脂糖微球上，并螯合金属离子Ni2+（或其它金属离子）而形成的一种亲和层析介质。影响蛋白质、多肽与金属离子亲和力大小的因素主要是蛋白质表面可结合的氨基酸（种类、数目和分布）、金属离子的种类和密度、层析条件（pH、盐的种类和浓度、添加剂等）。Ni-IDA具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、易于再生、成本较低等优点，广泛用于His标签蛋白等生物分子的分离纯化。
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参数 |
指标 |
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基质 |
交联琼脂糖凝胶 |
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配基 |
-N(CH2COOH)2 (IDA) |
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形状 |
球形 |
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平均粒径 |
90 μm |
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金属离子密度 |
50~70 μmol Ni2+/ml |
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最高流速* |
≥1500 cm/h |
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最高耐压（净压）* |
≥0.18MPa (1.8 bar) |
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化学稳定性** |
0.01 M HCl、0.1 M NaOH（37 °C, 7天）；1 M NaOH、70%乙酸（12 h）；30%异丙醇（30 min）；2% SDS（1 h） |
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避免使用的试剂 |
螯合剂，如EDTA、EGTA、柠檬酸等 |
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pH稳定性** |
2-14（短期，2 h）；3-12（长期，7天） |
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储存条件 |
20%乙醇，4-30℃ |
*：层析柱20 cm × 1.0 cm I.D，介质高度10cm，常温，溶液为H₂O的条件下测，耐压为扣除系统压力后的净压力。
**：未螯合Ni2+的介质。