保存条件】

4℃保存，有效期1年

【概述】

考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。

【使用方法】

1. 蛋白标准液的准备

a. 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。

b. 按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。如果有必要可以增加设置 0.0625mg/ml的蛋白标准。

2. 蛋白浓度测定

a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。

b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。

c. 各孔加入250µl G250染色液。

d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。

e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。

【注意事项】

1. 本品BSA因每次使用量较小，推荐分装使用。

2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）

3. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。

4. 将G250染色液回复至室温后使用，有利于提高检测灵敏度。

5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。