保存条件】

室温避光保存，有效期1年

【概述】

BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 

BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

【操作方法】

1.配制BCA工作液：

依据样品数量，将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液，并充分混匀。

注：配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可37℃水浴促溶。

2.稀释蛋白标准品：

蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表：

3.蛋白浓度的检测

a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。

b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。

c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。

注:也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。

4.数据计算

a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标

b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值（多孔则为平均OD）为纵坐标

c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得

样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度x=0.37mg/ml）

【注意事项】

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。

3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。

4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶，可适当37℃水浴促溶后使用。

5. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。