操作步骤： 1. 在15ml无酶离心管中最多添加2g土壤。 2. 分别添加2.5mlPowerBead溶液，0.25ml Buffer RS1溶液和0.8mlIRS溶液。 3. 加入3.5ml苯酚/氯仿/异戊醇溶液（pH 6.5-8.0）。 4. 将无酶离心管最大速度涡旋15min，直至两相层消失。 5. 停止涡旋后以2500×g室温离心10min。 6. 将上层水相（避免形成中间相和下层苯酚层）转移到无酶15ml离心管中，丢弃苯酚/氯仿/异戊醇等其它层液体。 注意：在有机质含量高的土壤中，两相层将很厚且牢固，取样时需特别注意。 7. 向水相中加入1.5ml Buffer SR3，并涡旋混合。在2–8°C下孵育10min，然后在室温下以2500×g离心10min。 8. 将上清液转移到新的15ml无酶离心管中，注意不要吸到沉淀物（如果有的话）。 9. 在离心管的上清液中加入5mlBuffer SR4，倒置或涡旋混合，在室温下孵育30min。 10. 以2500×g离心30min。 11. 倒弃上清液，将15ml的离心管在纸巾上倒置5min滤干残留液。 12. 摇匀BufferSR5以混匀并向15ml离心管中添加1ml。通过反复吹打或涡旋将沉淀完全重悬。 注意：如果沉淀难以重悬，请将试管置于45°C的加热块或水浴中10min，然后涡旋。重复直到沉淀重悬。 13. 为每个RNA分离样品准备一个核酸吸附柱（按以下方法预先处理吸附柱）： 13a.取下15ml收集管（已提供）的盖子，并将核酸吸附柱柱放入其中。 13b.将2mlBufferSR5添加到吸附柱中。让其完全重力流过，并收集在15ml的收集管中。 在上样RNA分离样品之前，请勿让色谱柱变干。 14. 将步骤12中的RNA分离样品添加到吸附柱上，使其重力流过进入15 ml收集管。 15. 将1 ml BufferSR5添加到吸附柱中，并使其完全重力流入15ml收集管中。 16. 将核酸吸附柱转移到新的15ml收集管中。 摇匀BufferSR6溶液以混合，然后向吸附柱中加入1ml以洗脱结合的RNA。 使BufferSR6重力流入15ml的收集管中。 17. 将洗脱的RNA转移到无酶2ml离心管中。加入1mlBuffer SR4。至少颠倒一次以混匀，在–20°C的温度下孵育至少10min。 18. 将无酶2ml离心管以13,000×g离心15min以沉淀RNA。 19. 倒出上清液，然后将2ml离心管倒入纸巾中10min以风干沉淀。 20. 将RNA沉淀重悬于100µl SR7溶液中。