商家描述
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操作步骤:
1. 在1.5ml无酶离心管中依次加入200μl待提取样品,400μl含Carrier RNA的Buffer RB(每2.5mlBuffer RB中加入50μlCarrier RNA溶液,现配现用)。
2. (可选步骤)将结合缓冲液加入样品后,将混合物在室温孵育10min。
通过可选的孵育步骤,可以将RNA产量提高两倍,从而提高灵敏度。当获得结果的时间很关键时,可以省略此孵育步骤。
3. 把吸附柱套在2ml收集管中。将上个步骤所得溶液加入柱中,8000×g离心30s。离心完后倒掉收集管中的废液。
4. 向吸附柱中加入500μl BufferIRB,8000×g离心1min,离心完成后倒掉收集管中的废液。
5. 向吸附柱中加入500μl Buffer WB(已加入无水乙醇),8000×g离心1min,离心完后倒掉收集管中的废液。
6. 重复步骤5。
7. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中,13000×g离心2min以除尽Buffer WB。将吸附柱套入新的1.5ml无酶离心管管中并置于室温放置5-10min彻底晾干乙醇。
注意:BufferWB中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。
8. 向吸附柱膜中间位置悬空滴加50μl Buffer EB(或无酶水),室温静置2min后,12000×g离心2min收集核酸溶液。丢弃柱子,盖上离心管盖子并置于-80℃保存。
注意:洗脱体积不应小于30μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。为了提高核酸的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置2min,13000×g离心4min,将核酸溶液收集到离心管中。