操作步骤： 1. 取适量菌液于离心机中常温5,000×g离心10min收集革兰氏阴性或者阳性细菌样品（≤5×108Cells）。 若需要处理更多细菌，则相应增加后续各种试剂用量。 2. 倒弃培养基，在吸水纸轻轻拍打除尽残液（或用吸头吸尽） 3. 将20µlProteinase KSolution添加到100µl Lysozyme Solution中，并将混合物混匀加入到沉淀中，通过上下吹打数次小心地重悬沉淀。 若细菌量较大可按细菌量加倍加入Proteinase K及含溶菌酶的Buffer TE，后续Buffer RLT也要相应增加体积。 4. 涡旋混匀10s，在室温 (15–25°C)下孵育10min。在孵育过程中，至少每2min涡旋10s混匀。 5. 加入350µl Buffer RLT（使用前请检查Buffer RLT是否加入β-巯基乙醇或DTT）并剧烈振荡。如果可见颗粒物质，通过离心将其沉淀，取上清液备用。 6. 添加250µl体积的无水乙醇于步骤5的上清溶液中，通过移液混匀，不要离心。 加入乙醇后可能会形成沉淀为正常现象，这不会影响后续的操作步骤。 7. 将步骤6混匀后的溶液转移入RNase-free吸附柱中并套上2ml收集管，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。 吸附柱最大上柱量为700μl，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2ml收集管中。 8. （可选步骤1）向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。再向吸附柱中央加入80μl DNase Ⅰ工作液，室温（15℃-25℃）静置15min。配制DNase Ⅰ工作液：取10μl DNase Ⅰ储备液入新的RNase-free离心管中，并加入70μl Buffer RDD，轻柔混匀。 注意：DNase Ⅰ对物理变性特别敏感，所以混匀时请上下倒置轻柔混匀，切勿涡旋。请确认DNase Ⅰ工作液加入到正中央的柱膜上，否则DNase消化效果会不理想。 9. 向吸附柱中加入700μl Buffer RW1，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。 10. 将吸附柱重收套回收集管中，向吸附柱中加入500μl Buffer RPE（使用前请确认Buffer RPE按要求加入4倍体积无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。 11. 重复操作步骤10一次。 12. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中,以最大转速(~13,400×g)离心3min干燥柱子。 13. 将吸附柱套入新的无酶1.5ml离心管中，并置于无酶环境中开盖静置5-10min至乙醇晾干。 若吸附柱中残留乙醇将会对纯化后的RNA的下游实验造成影响。 14. 向吸附柱膜正中央加入50-100μl RNase-free Water，盖上盖子室温静置2-3 min。后置于最大转速(~13,400×g)离心3min得到RNA溶液。 RNA洗脱体积不应少于30μl，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应立即进行下游实验或置于-80℃储存。