操作步骤： 1. 请根据样品种类进行以下步骤（1a为动物细胞，1b为动物组织） 1a.收集动物细胞：悬浮细胞可直接300×g离心5min并仔细吸除上清留沉淀待使用；单层贴壁细胞可通过直接裂解法（吸尽培养基留下贴壁细胞，待步骤2用Buffer RLT裂解）或胰酶处理法（吸尽培养基留下贴壁细胞，用PBS清洗细胞，吸除PBS后使用含0.10%-0.25%胰酶的PBS使细胞脱落，加入含有血清的培养基使胰酶失活后转入1.5ml无酶离心管中300×g离心5min，吸除上清留沉淀待使用） 注意：收集细胞数量不要超过1×107，收集细胞时一定要将细胞培养基去除干净，否则会导致步骤2时细胞裂解不完全，影响RNA与吸附柱的结合，导致RNA的产量降低。 2b.动物组织匀浆裂解处理：将10mg-30mg动物组织转移入1.5ml无酶离心管中并加入600μl Buffer RLT（动物组织量不要超过30mg）使用前请检查Buffer RLT是否加入β-巯基乙醇，使用研磨杵或电动研磨机将动物组织彻底研磨匀浆。直接进行步骤3. 匀浆时间根据样本裂解难易程度决定，亦可匀浆后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。 2. 样品裂解：对于1a中使用直接裂解法的细胞应在培养皿或培养瓶中直接加入600μl Buffer RLT（使用前请检查Buffer RLT是否加入β-巯基乙醇）进行细胞裂解，之后将裂解液全部吸入1.5ml无酶离心管中进行下一步操作。对于1a中使用胰酶处理法的细胞应在无酶离心管中加入600μl Buffer RLT涡旋1min裂解并进行下一步操作 若细胞量少于5×106可使用350μl Buffer RLT。若细胞量较大，可涡旋后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。 3. 将无酶离心管放入高速离心机以最大转速(~13,400×g)离心3min。收集上清入新的1.5ml无酶离心管中，并加入1倍体积的70%乙醇混匀。如600μl溶液则加入600μl 70%乙醇。 配制70%乙醇时请使用RNase-free water。 4. 将步骤3混匀后的溶液转移入RNase-free吸附柱中并套上2ml收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。 吸附柱最大上柱量为700μl，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2ml收集管中。 5. 向吸附柱中加入700μl Buffer RW1（使用前请确认BufferRW1是否按要求加入0.25倍体积无水乙醇）, ≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。 6. 向吸附柱中加入500μl Buffer RPE（使用前请确认Buffer RPE是否按要求加入4倍体积无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。 7. 重复步骤6一次。 8. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中,以最大转速(~13,400×g)离心3min干燥柱膜。 9. 将吸附柱套入新的无酶1.5ml离心管管中，并置于无酶的环境中开盖静置5-10min至乙醇晾干。 若吸附柱中残留乙醇将会对纯化后的RNA的下游实验造成影响。 10. 向吸附柱膜正中央加入50-100μl RNase-free Water，盖上盖子室温静置3-5 min。后置于离心机中≥12,000×g(≥13,000 rpm)离心3min得到RNA溶液。 RNA洗脱体积不应少于30μl，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应置于-81℃储存。