操作步骤： 1. 请根据样品种类进行以下步骤（1a为动物细胞，1b为动物组织） 1a.收集动物细胞：悬浮细胞可直接300×g离心5min并仔细吸除上清留沉淀待使用；单层贴壁细胞可通过直接裂解法（吸尽培养基留下贴壁细胞，进行步骤2裂解）或胰酶处理法（吸尽培养基留下贴壁细胞，用PBS清洗细胞，吸除PBS后使用含0.10%-0.25%胰酶使细胞脱落，加入含有血清的培养基使胰酶失活后转入1.5ml无酶离心管中300×g离心5min，吸除上清留沉淀待使用） 注意：收集细胞数量不要超过1×107，收集细胞时一定要将细胞培养基去除干净，否则会导致步骤2时细胞裂解不完全，影响RNA与吸附柱的结合，导致RNA的产量降低。 1b.动物组织匀浆裂解处理：将10mg-30mg动物组织转移入1.5ml无酶离心管中并加入700μl RNAEx ZOL（动物组织量不要超过30mg），使用研磨杵或电动研磨机将动物组织彻底研磨匀浆。直接进行步骤3. 匀浆时间根据样本裂解难易程度决定，亦可匀浆后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。RNAEx ZOL有较多有机试剂具一定毒性，匀浆时注意不要溅到皮肤或眼睛等部位，建议使用防护镜操作。 2. 样品裂解：对于1a中使用直接裂解法的细胞应在培养皿或培养瓶中直接加入700μl RNAEx ZOL破碎细胞，涡旋或吹匀混合。将裂解液移入无酶1.5ml离心管中。涡旋或移液器混合并确保没有细胞团块可见。 细胞沉淀不完全松动吹匀可能会导致裂解效率低下和RNA产量降低。一般≤3×106个细胞若细胞量较大，可涡旋后静置3-5min延长裂解时间（期间颠倒吹匀2-3次）。若不能及时提取，裂解后溶液可至于-80℃储存3-6个月。 3. 将含裂解物离心管置于常温静置2-5min. 该步骤促进核蛋白复合物的解离。若细胞量较少，可不需静置；若细胞量较大，可适当延长静置裂解时间。 4. 向含裂解物离心管中加入140μl氯仿（RNA提取辅助试剂（ES-8522, ECOTOP SCIENTIFIC））,用力摇动或涡旋15s。 彻底混合对于随后的相分离很重要。 5. 将离心管置于常温静置2-3min. 6. 在4°C下以12,000×g离心15min。 离心后，样品分为3相：上层含有RNA的无色水相；白色的中相间和下层红色有机相。上层水相的体积应约为350µl。 7. 将上层水相转移到新的无酶1.5ml离心管中，加入约1倍体积无水乙醇，移液器吹打彻底混匀。不要离心，立即进行下一步骤。 加入乙醇后可能会形成沉淀，为正常现象，不会影响提取过程和结果。 8. 将上一步骤混匀后的溶液约700µl转移入RNA吸附柱中并套上2ml收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)室温下离心30s，弃废液。 吸附柱最大上柱量为700μl，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于2ml收集管中。 9. 向吸附柱中加入700μl Buffer RW1（使用前请确认BufferRW1是否按要求加入0.25倍体积无水乙醇）, ≥8000×g(≥10,000 rpm)室温下离心30s，弃废液。 10. 向吸附柱中加入500μl Buffer RPE（使用前请确认Buffer RPE是否按要求加入4倍体积无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，弃废液。 11. 重复步骤10一次。 12. 倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中,以最大转速(~13,400×g)离心3min干燥柱膜。 13. 将吸附柱套入新的无酶1.5ml离心管中，并置于无酶的环境中开盖静置5-10min至乙醇晾干。 若吸附柱中残留乙醇将会对纯化后的RNA的下游实验造成影响。 14. 向吸附柱膜正中央加入50-100μl RNase-free Water，盖上盖子室温静置3-5 min。后置于离心机中≥12,000×g(≥13,000 rpm)离心3min得到RNA溶液。 RNA洗脱体积不应少于30μl，否则影响洗脱效率。洗脱后的RNA溶液应置于-81℃储存。