操作步骤： 1. 根据样品类型进行以下操作： 1a：哺乳动物全血、白细胞层、培养细胞 （1）取200μl样本（如果样本为培养细胞则细胞数应在104-106之间，离心后用PBS重悬）入1.5ml无酶离心管中，加入200μl Buffer BB和20μl Proteinase K Solution，立即混匀并在70℃孵育10-15min。 样本总量达不到200μl时可加PBS补至200μl。 （2）选做：加入5μl 20mg/ml RNA酶，上下颠倒混匀，37℃或室温孵育5-10min。 （3）向离心管中加入100μl异丙醇混匀，进行步骤2。 1b：哺乳动物组织或鼠尾 （1）取25-50mg样本入1.5ml无酶离心管中，加入200μlTissue Lysis Buffer和20μl Proteinase K Solution,立即混匀并在55℃下孵育1h直至组织完全消失，鼠尾组织需延长孵育时间至3h或更长。 孵育前可将样品剪成小块或用研磨杵/电动研磨机破碎组织，可增加核酸产量。 孵育完后使用1ml无针头的一次性注射器吹打溶液3-5次以剪切溶解的鼠尾样本可提升核酸产量。 （2）加入200μl Buffer BB立即混匀并在70℃孵育10-15min。 鼠尾样品无需70℃孵育。 （3）选做：加入5μl 20mg/ml RNA酶，上下颠倒混匀，37℃或室温孵育5-10min。 （4）向离心管中加入100μl异丙醇混匀。如若为鼠尾样品则无需进行步骤（5）,13,000×g离心5min，取上清直接进行步骤2。 （5）用移液器装载1ml枪头吸取溶液，这时候如若吸取到不溶的组织颗粒并阻塞枪头，将枪头连同不溶物取出溶液中，并将其丢弃，进行步骤2。 1c：真菌细胞或细菌细胞 （1）取200μl真菌或细菌溶液，3,000×g离心5min，去除上清，加入200μl PBS重悬细胞。 （2）对于真菌细胞：加入10μl5000U/ml破壁酶溶液(Lyticase Solution)至溶液中，充分涡旋混匀15-20s后37℃孵育30-60min。 对于细菌细胞：加入30μl50mg/ml溶菌酶溶液（Lysozyme Solution）至溶液中，充分涡旋混匀15-20s后37℃孵育15-30min。 （3）加入200μl Buffer BB和20μl Proteinase K Solution，立即混匀并在70℃孵育10-15min。 （4）选做：加入5μl 20mg/ml RNA酶，上下颠倒混匀，37℃或室温孵育5-10min。 （5）向离心管中加入100μl异丙醇混匀，进行步骤2。 1d：FFPE组织切片 （1）将FFPE组织切片放入二甲苯中脱蜡约30min。 脱蜡时间取决于切片厚度。 （2）通过分级乙醇处理将组织切片再水化：无水乙醇中放置10s；80%乙醇中放置10s；60%乙醇中放置10s；40%乙醇中放置10s；超纯水中放置10s。 （3）在显微镜下观察切片，并用手术刀从再水化切片中切割所需的组织区域，确定样本重量在25-50mg之间，将样品转移到无酶的1.5ml微离心管中。 （4）加入200μlTissue Lysis Buffer和20μl Proteinase K Solution，立即混匀并在37℃孵育过夜。 （5）再加入20μl Proteinase K Solution，立即混匀并在55℃孵育1-2h。 （6）加入200μl Buffer BB，彻底混匀并在70℃孵育10-15min。 （7）选做：加入5μl 20mg/ml RNA酶，上下颠倒混匀，37℃或室温孵育5-10min。 （8）向离心管中加入100μl异丙醇混匀。 （9）用移液器装载1ml枪头吸取溶液，这时候如若吸取到不溶的组织颗粒并阻塞枪头，将枪头连同不溶物取出溶液中，并将其丢弃，进行步骤2。 2. 把吸附柱套在2ml收集管中。将上个步骤所得溶液加入柱中，8000×g离心1min。离心完后倒掉收集管中的废液。 如果出现堵柱现象，则将吸附柱(套在2ml收集管中）再次全速离心1min直至溶液全部过柱。 3. 向吸附柱中加入500μl BufferIRB，8000×g离心1min，离心完后倒掉收集管中的废液。 4. 向吸附柱中加入500ul Buffer WB（已加入无水乙醇），8000×g离心1min，离心完后倒掉收集管中的废液。 5. 重复操作步骤4一次。 6. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，12000×g离心2min以除尽Buffer WB。将吸附柱套入新的1.5ml无酶离心管中并置于室温放置5-10min彻底晾干乙醇。 注意：BufferWB中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。 7. 向吸附柱膜中间位置悬空滴加50-100μl70℃预热Buffer EB，室温静置2min后12000×g离心2min收集核酸溶液。丢弃柱子，盖上离心管盖子置于-20℃保存。 注意：洗脱体积不应小于30μl，体积过少影响回收效率。70℃预热Buffer EB能提高核酸的回收量。为了提高核酸的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中按步骤9方法再次离心收集核酸。