操作步骤： 1. 取750 µlBufferSP和0.25 g研磨珠至2 ml离心管中。 2. 在上述2 ml离心管中加入土壤样本0.25 g，涡旋混匀15s。 3. 向样本中加入60 µlBuffer C1，最大速度涡旋振荡10 min至样本充分混匀裂解。 使用前应注意Buffer C1是否出现沉淀，如若出现沉淀，应加热溶解混匀再使用。 4. 常温10,000×g离心30 s，转移上清液至新的2ml离心管中。 离心力不应超过10,000×g，并且离心时应在旁边观察离心机是否能正常运作。如若土壤沉淀效果不佳，可再次10,000×g离心3min。上清液约有400-500μl，可能还会含有一点土壤颗粒。 5. 加入250μl Buffer C2，涡旋5s后4℃放置5min。 注：可以跳过5分钟的孵育。但是为了获得更好的提取效果我们建议您保留该步骤。 6. 10,000×g离心1min，转移上清液（约600μl）至新的2ml离心管中。 此次上清液转移应避免吸到任何颗粒，否则会影响DNA纯度。 7. 加入200μl Buffer C3混匀，4℃放置5min。 注：可以跳过5分钟的孵育。但是为了获得更好的提取效果我们建议您保留该步骤。 8. 10,000×g离心1min，转移上清液（约750μl）至新的2ml离心管中。 此次上清液转移应避免吸到任何颗粒，否则会影响DNA纯度。 9. 加入1.2ml Buffer C4，涡旋5s。 10. 把吸附柱套在2ml收集管中。将上个步骤所得溶液取700μl加入柱中，10,000×g离心1min。离心完后倒掉收集管中的废液。重复该步骤，直到溶液全部完成上柱过滤。 11. 向吸附柱中加入500μl BufferC5（使用前确认已加入无水乙醇），10,000×g离心30s，离心完后倒掉收集管中的废液。 12. 向吸附柱中加入500μl70%乙醇，10,000×g离心30s，离心完后倒掉收集管中的废液。 13. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，12,000×g离心2min以除尽BufferC5。将吸附柱套入新的2ml离心管中并置于室温放置5-10min彻底晾干。 注意：BufferC5中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。 14. 向吸附柱膜中间位置悬空滴加50-100μl BufferC6，室温静置2min后，最大转速(~13,400×g)离心2min收集DNA溶液。丢弃柱子，盖上离心管盖子置于-20℃保存。 注意：洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了提高DNA的回收量，可将BufferC6加热（约60℃）并洗脱两次，可增加约15-20%得率。