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植物基因组DNA提取试剂盒
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  • 货号 EK-1206-100T
  • 品牌 EcoTop Bio/亿涛 ( 经销商 )
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  • 规格/包装 100T
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操作步骤: 1. 用液氮把植物/真菌样品研磨成粉末,转移50~200mg新鲜/冻藏样品或15~50mg干燥样品至2ml离心管中。 也可以使用物理研磨设备将植物/真菌样品破碎。 2. 加入400 µlBufferAP1和4 µl RNase ASolution(100 mg / ml)至最大200 mg(湿重)或50 mg(干燥)破坏的植物或真菌组织,并剧烈涡旋。 注意:请勿在使用前混合Buffer AP1和RNaseASolution。 3. 将混合物在65°C孵育15-30分钟。在孵育期间颠倒离心管混匀2-3次。 这一步主要是为了裂解细胞。 4. 向混合物中加入130 µl BufferP3,混匀并在冰上孵育5分钟。 此步骤沉淀去除蛋白质和多糖。 5. 在20,000×g(~14,000 rpm)下将混合物室温离心5分钟。 在此步骤中,某些植物材料可能会产生非常粘稠的裂解物和大量沉淀物。建议高转速离心,若无法达到14000rpm则建议延长离心时间取得最佳离心效果以减少后续提取影响。 6. 将裂解液吸移到置于2 ml收集管中的过滤柱(含套管)中,并以20,000×g(14,000 rpm)离心2分钟。 吸液时可能需要剪掉移液器吸头的前端,以将粘稠的裂解液移液到过滤柱(含套管)中。过滤柱可去除大部分沉淀物和细胞碎片,但少量会通过并在收集管中形成沉淀。注意不要在下一步骤中吸取该沉淀物。 7. 将步骤6中的上清溶液部分转移到新的试管中,注意不要吸到细胞碎片沉淀。 一般通常可以回收约450µl裂解液。对于某些植物物种,回收的裂解液较少。在这种情况下,请确定体积以备下一步加入Buffer AW1参考。 8. 将1.5体积的Buffer AW1添加到澄清的裂解液中,并用移液器吹打混匀。 例如,向450µl裂解液中添加675µl Buffer AW1。如果裂解液的体积较小,请相应减少BufferAW1的量。加入缓冲液AW1后可能会形成沉淀,但这不会影响后续的提取。确保加入的Buffer AW1中提前加入相应乙醇混匀,将Buffer AW1直接吸到澄清的裂解液中并立即混合非常重要。 9. 将650µl步骤8的混合物(包括可能形成的任何沉淀物)转移到核酸吸附柱(提前套在2ml收集管中),并以10,000×g转速离心1分钟,弃滤液。 每次加入650 µl混合物至核酸吸附柱中离心,直至完成所有混合物的离心。 10. 重复步骤9直至完成全部的混合物离心,弃滤液。 11. 向核酸吸附柱中加入500µlBuffer AW2,并以10,000×g转速离心1分钟,弃滤液。 注意:确保BufferAW2使用前加入了相应的无水乙醇。 12. 重复操作步骤11一次。 13. 倒弃滤液,将吸附柱放入收集管中,最大转速(~13,400×g)离心2分钟干燥柱子,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。 离心是为将Buffer AW2中乙醇的残留去除以免影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。。 14. 把吸附柱转移至无菌的1.5ml离心管中,室温静置5-10分钟以彻底挥发残留的乙醇。 15. 加入50-100µl Buffer AE至核酸吸附柱的膜中央并盖上盖子静置5分钟,后以最大转速(~13,400×g)离心2分钟以洗脱DNA至离心管中。 若需要获得最高产量,可重复操作步骤15进行第二次洗脱。BufferAE在55-60℃预热后加入膜中央洗脱也可提高DNA获得率。 16. 弃去吸附柱,将DNA溶液于-21℃保存或进行下游实验。
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