操作步骤： 1. 请根据样品种类进行以下步骤（A为培养细胞，B为动物组织） A. 培养细胞的消化裂解（细胞总量≤5×106个） （1）细胞消化完成后将细胞消化混合液2300×g离心1min收集细胞，小心移去培养液留下白色细胞沉淀。 （2）加入1ml PBS溶液重悬细胞，2300×g离心1min，吸去上清溶液留下细胞沉淀。 （3）加入40μl PBS溶液，用移液器吹打以重悬细胞。 （4）加入100μl Buffer GL，涡旋15s彻底混匀。 （5）加入10μl Proteinase K溶液（20mg/ml）至样品中，再次涡旋15s。 （6）将样品置于56℃水浴15min，然后70℃水浴2min。 （7）（可选）加入5μl RNase A Solution至消化液中，颠倒混匀，室温或37℃放置15min。 B. 动物组织的消化裂解（5~50mg） （1）把5~50mg组织研磨或剪成尽量小的碎片，转移至1.5ml 离心管中。按顺序分别加入50μl1×PBS、50μl Buffer GL和10μl Proteinase K溶液(20mg/ml)，涡旋混匀15s。56℃水浴30-60min（若组织块过大或消化慢可延长消化时间，最长可过夜），期间需颠倒混匀几次或震荡水浴。 注意：适当的组织量才能获得理想结果。过多的样品会降低产量和纯度。脾、肝、肾等富含DNA的样品不宜超过20mg，肌肉和皮肤等可达50mg。通过液氮研磨、机械匀桨器等研磨处理组织样品可缩短消化时间。消化时间取决于样品类型和匀浆效果，一般组织样品需0.5-3h，老鼠尾巴需6-8h。过夜消化不影响后续的实验操作及最终结果。 （2）（可选）加入5μl RNase A Solution至消化液中，颠倒混匀，室温或37℃放置15min。 RNA消化时间取决于样品类型，肝、肾等富含RNA，需较长消化时间。 2. 加入500μl Buffer GE至消化液中，充分涡旋混匀15-20s后室温静置10min。 注意：消化完成后应无组织碎片残留，若有则12000×g离心3min弃去不溶物再执行步骤2。 3. 把吸附柱套在2ml收集管中。将上一步骤所得溶液加入柱中，12000×g离心1min。倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 若柱子出现堵塞，可提高转速至14000×g离心3-5min。若总溶液体积超过700μl则分次上柱。 4. 向吸附柱中加入500μl Buffer GE，12000×g离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 5. 向吸附柱中加入500μl Buffer GW（已加入无水乙醇），12000×g离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 6. 重复步骤5一次。 7. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜。将吸附柱套入新的1.5ml离心管中并置于室温放置5-10min彻底晾干。 注意：Buffer GW中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。 8. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加50-100μl Buffer EB，室温静置2min后，最大转速 (~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。 注意：洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了提高DNA的回收量，可将Buffer EB加热（约60℃）并洗脱两次，可增加约15-22%得率。