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动物血液基因组大量提取试剂盒
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  • 货号 EK-1203-50T
  • 品牌 EcoTop Bio/亿涛 ( 经销商 )
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  • 规格/包装 50T
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操作步骤: 1. 在 1.5-2.0ml离心管中,加入15µl Proteinase K溶液。 注意:Proteinase K溶液不能与Buffer BL先混合。 2. 转移250μl抗凝的血液,血清,血浆或其它体液样品至蛋白酶的离心管中。轻轻振荡混匀。若血液小于250μl,用PBS或Buffer ATE调整总体积至250μl。 3. 加入250μl Buffer BL至样品中。盖上盖子,颠倒3~5次,最高速度涡旋混匀15-20秒。后56℃水浴15分钟,其间涡旋混匀2~3次。 注意:涡旋时须让裂解液与血液充分混匀才能保证裂解效果。 4. (可选步骤)若需去除RNA,加入10µl RNaseASolution至裂解液中,室温静置10分钟。 5. 加入250μl无水乙醇至裂解样品中,盖上盖子,快速颠倒3~5次,涡旋混匀30秒。 6. 把DNA结合柱装在2ml收集管中。转移混合液至柱子中,并以10,000×g离心1分钟。 7. 倒弃流出液,把柱子重新装回收集管中。加入500μl Buffer IRB至柱子上并以10,000×g离心1分钟。 8. 倒弃流出液,把柱子重新装回收集管中。加入500μl Buffer BW(请先检查是否已加入无水乙醇)至柱子中,10,000×g离心1分钟。 9. 重复操作步骤8一次。 10. 倒弃流出液,把柱子重新装回收集管中。12,000×g离心空柱2分钟,以甩干柱子的残留物质。(这一步要尽量提高离心速度以减少乙醇的残留)。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱放置到新的灭菌的1.5ml EP管中,并打开盖子于室温放置数分钟(约10分钟),以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 11. 将柱子转移至新的1.5ml无菌的离心管(自备),加入30~100µlBuffer ATE至柱子的膜中央,静置2分钟后以12,000×g离心2分钟收集离心下的基因组DNA。 Buffer ATE在55-60℃预热后加入膜中央洗脱可提高核酸获得率。 12. 弃去柱子,将基因组DNA溶液于-20℃保存(短期可保存2-8℃)或进行下游实验。 附加方案:处理 0.25-1ml的血液DNA抽提(注:该方案需要另外订购Buffer RBC) 1. 转移0.25-1ml抗凝血液样品至2-15ml离心管中。 2. 加入2.5倍体积Buffer RBC至样品中,颠倒混匀5-10次并静置3分钟。 3. 2,000×g离心5分钟。小心倒弃上清液,并反扣于吸水纸上吸尽残液。(注:倒弃上清液时,小心不要倒弃细胞核沉淀。) 4. 加入250µl灭菌水和25µl蛋白酶K溶液到样品中。涡旋30秒打散沉淀团。 5. 按前述第9步加入Buffer BL开始进行操作。
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