操作步骤： 1. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶，电泳分离DNA片段。当DNA片段分离后，将凝胶置于紫外灯下，用干净锋利的手术刀快速切下含目的片段大小的DNA凝胶。 为避免DNA片段受到损伤，应尽量减少凝胶的紫外照射时间，切胶时应尽量切去多余凝胶。 2. 放入1.5ml离心管中并称取凝胶块的重量，加入3倍体积的Buffer QG（如凝胶称重结果为100mg，则其体积约等于100µl，应加入300µl Buffer QG）。 对于>2%的琼脂糖凝胶，添加6倍体积的Buffer QG。 3. 50℃水浴10min（或直至凝胶完全溶解即可），水浴期间可颠倒混匀加速溶胶。 注意：若回收<300bp的DNA片段可在完全溶胶后加入一倍凝胶体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA能力较强。 4. 凝胶完全溶解后，检查颜色是否为黄色（类似于没有溶解琼脂糖的Buffer QG）。 如果混合物的颜色为红色，则加入10µl 3 M醋酸钠(pH 5.2)并混合，混合物的颜色会变成橙色或黄色。DNA吸附到膜上仅在pH ≤ 7.5时有效。Buffer QG含有一种pH指示剂，在较高pH时为红色，可通过颜色轻松确定DNA结合的最佳pH。 5. （选做）向上述溶胶液中加入1倍凝胶体积的异丙醇并混合。 例如，如果琼脂糖凝胶切片为100mg，则添加100µl异丙醇。此步骤增加了≤500bp和≥4 kb的DNA片段的产量。对于500bp-4kb之间的DNA片段，添加异丙醇对产量没有影响。 6. 将吸附柱套在2ml收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g (≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 吸附柱最大容量为700µl，若样品体积大于700µl，可分批加入；为提高回收率，可短暂离心用于溶胶的1.5ml离心管后再将溶液转移如吸附柱。 7. 向吸附柱中加入500µl Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5min后再离心。 8. 重复操作步骤7一次。 9. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5ml离心管中并于室温开盖放置5-10min彻底晾干。 注意：Buffer PW中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。 10. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加30-50µl Buffer EB，盖上盖子室温静置2min后，最大转速(~13,400×g)离心2min收集DNA溶液并置于-20℃保存。 注意：洗脱体积不应小于30μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了提高DNA的回收量，可重复操作步骤10一次。