BL21(DE3) pGRO7 Chaperone Competent Cell

l 产品规格

货号：KTSM113L

规格：100 μL/支

pUC19(control vector，100 pg/μL）：5μL

保存条件：-80℃   

有效期：6个月

运输：干冰运输

l 基因型

E.coli B F^-ompT gal dcm lon hsdS_B(r_B^-mg^-) [malB⁺]_K-12(λ^S)

l 产品说明

BL21(DE3) pGRO7 Chaperone Competent Cell是由转化了伴侣蛋白质粒pGRO7的Escerichia coli BL21制成的感受态细胞。分子伴侣参与蛋白质折叠过程，且人们已经通过大量的实验研究来表明体内蛋白折叠机理。本制品中含有的pGRO7质粒，能有效表达一种具有协同作用、共同参与蛋白折叠的分子伴侣。靶蛋白与分子伴侣共同表达，便可增加可溶性蛋白质的回收比率，而用常规方法，由于包涵体的形成，这些表达蛋白质常常是不可纯化的。该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区(DE3 区含有T7 噬菌体 RNA 聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET 系列、pGEX、pMAL 等质粒的蛋白表达。

当进行与靶蛋白的共表达实验时，通常需要三步：

1. 用伴侣蛋白质粒转化宿主 E.coli；

2. 用转化体制备感受态细胞；

3. 用质粒转化感受态细胞并表达靶蛋白。

如果使用本产品，只需一步转化就可构建共表达体系，因为使用的E.coli BL21（DE3） 感受态细胞已转化有伴侣蛋白质粒。

l 〈可使用的表达质粒〉

 pGRO7伴侣蛋白质粒带有来源于pACYC 的复制起始位点和氯霉素抗性基因(Cm^r基因)，可以与常用的ColE1型、具有氨苄抗性(Amp^r)筛选标记的载体共存于E.coli表达体系中。该

伴侣蛋白基因位于araB启动子下游，而目的基因处于lac 或其它启动子的控制之下，目的蛋白质与伴侣蛋白可分别诱导表达，分子伴侣的诱导表达用 0.5-4 mg/ml  L-Arabinose，培养基、培养温度、通气条件、诱导起始时刻、诱导物浓度、诱导时间等等均由于表达的目的蛋白的不同而不同，因此，建议摸索蛋白表达的适宜条件。另外，对启动子必要的元件araC也配置在质粒上。需注意的是该伴侣蛋白质粒不可与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。

l 分子伴侣质粒图谱

l 操作方法

1. 感受态细胞使用前在冰中融化。

2. 细胞融化后，轻柔混合均匀，取 100 μl 移入离心管中（避免剧烈振荡）。

3. 加入目的蛋白质表达用质粒（≤10 ng）。

4. 冰浴30 分钟，42℃放置 45 秒，再冰浴1-2分钟。

5. 加入 37℃预温的 SOC 培养基达到终体积 1 ml。