 产品说明
康体生命改造的配体 Streptactin-XT 偶联到琼脂糖珠上，可作为一种高亲和力的层析填料，
用于纯化融合 Strep II 标签（W-S-H-P-Q-F-E-K)或 TwinStrep II 标签（S-A-W-S-H-P-Q-F-E-K-G-
G-G-S-G-G-G-S-G-G-S-A-W-S-H-P-Q-F-E-K)的蛋白。 Streptactin-XT 配体与目标蛋白的亲和力
在 nM~pM 范围，无需孵育，极高的亲和力仅需一个纯化步骤即可获得高纯度的蛋白质。
该填料兼容多种洗涤剂、变性剂和其他添加剂。样品中低于 50μM 的 D-生物素不会影响目的
蛋白的结合。与目的蛋白结合后可用洗脱液（Elution buffer of Streptactin-XT，即 E-XT）可逆
洗脱。再生液（Regeneration buffer of Streptactin-XT，即 R-XT）再生 10 次后，仍不影响性能。


 产品应用
本产品常用于从多种表达系统中高效快速地纯化融合 Strep II 标签/ TwinStrep II 标签的蛋白。
也适用于免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(CoIP)、染色质免疫沉淀(CHIP)、RNA 结合蛋白免疫沉淀
(RIP)等实验。
 产品属性
珠子直径：~45-165 μm（4%交联琼脂糖珠）
配体：Streptactin-XT
配体偶联量：8 mg/ml
介质占比：50%
耐压：0.3 MPa

载量：3-5mg Strep II 标签蛋白/ml 介质
保护液： 1×PBS，含 50% 甘油和 0.03% NaN3
储存条件：2~8℃，避免冻存，有效期 1 年
 推荐使用溶液

 操作说明
 离心管纯化
1．平衡
1）取适量填料加入离心管中，1000 ×g 离心 3 分钟弃上清；
2）加入提前预冷的 5 倍介质体积的 Dilution/Wash buffer，4℃，1000 ×g 离心 3 分钟，去掉
上清，重复 2 次。
2．结合蛋白
1）将准备好的蛋白样品，加入平衡后的填料中，混匀；
2）4℃ 孵育 10 分钟（可选步骤）；
3）4℃，1000 ×g 离心 3 分钟，去掉上清。
3．洗杂
1）加入 5 倍介质体积的 Dilution/Wash buffer 重悬填料；
2）4℃，1000×g 离心 3 分钟，去掉上清，重复 2-3 次
4．洗脱结合蛋白
用 3 倍柱体积的 E-XT 洗脱目的蛋白，分管收集；或第一次加入 0.6 倍柱体积的洗脱液，
收集并标记为 E1，第二次加入 1.6 倍柱体积的洗脱液，收集并标记为 E2，第三次加入 0.8 倍柱
体积的洗脱液，收集并标记为 E3。
 重力柱纯化
1．装柱
1）取一支空柱，将下垫片压制柱底部并压实，用去离子水冲洗垫片，待水从下出口流出
后马上关闭下出口。
2）取适量 填料混悬液（保护液与填料比是 1：1），打开下出口流干保护液。
2．平衡：加入 5 倍柱体积的 Dilution/Wash buffer，平衡 3 次。
3．上样：将样品加入平衡好的柱子中，样品保留至少 2-10 分钟, 保证样品和介质充分接
触，可以多次上样增加结合效率。
【注】注意收集流出液，用于后续 SDS-PAGE 检测蛋白的结合情况。
4．平衡/洗杂：用 5 倍柱体积的 Dilution/Wash buffer 洗杂 1~3 次，去除非特异性结合的杂
蛋白，收集每次的洗杂液。
5．洗脱：用 3 倍柱体积的 E-XT 洗脱目的蛋白，分管收集；或第一次加入 0.6 倍柱体积的
洗脱液，收集并标记为 E1，第二次加入 1.6 倍柱体积的洗脱液，收集并标记为 E2，第三次加
入 0.8 倍柱体积的洗脱液，收集并标记为 E3。
 中压层析柱纯化
1．装柱
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在
柱底部留出 1~2 cm 的去离子水。
2）将填料悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可
减少气泡的产生。
3）打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过
层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形
成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到
一个很好的装填效果。当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上 3 倍柱床体积的去离
子水，标上柱床高度。
【注】在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的 75%。
2．平衡：使用至少 5 倍柱床体积的 Dilution/Wash buffer 平衡色谱柱。
3．上样：利用泵或样品环上样。
注意:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超
过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
4．平衡/洗杂：用 Dilution/Wash buffer 冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一
般至少 10~15 个柱体积）。
5．洗脱：使用 5~10 倍柱体积的 E-XT 洗脱，分管收集洗脱液，即目的蛋白组分。
 再生和保存
1．再生
1）5 倍柱体积的 Dilution/Wash buffer 清洗柱子；
2）6 倍柱体积的 R-XT 再生液再生后立刻去除 R-XT，并立即加入 8 倍柱体积的
Dilution/Wash buffer 清洗 1~2 次；
注：也可以选择用新配置的 10 mM 氢氧化钠溶液进行再生。
2．保存
填料再生清洗后保存在等体积的 Dilution/Wash buffer 液中，2~8℃保存。
 产品信息

声明：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的医疗或诊断程序等。