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商家描述
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Fast DNA Assembly Mix （同源重组克隆酶）
【储存条件】 -20℃保存。
【储存条件】 -20℃保存。
【产品简介】
本产品可以高效、准确的组装 DNA 片段，从而实现 简单快速的无缝克隆。该产品可以在一管内，恒温 条件下，有效的连接多个带有重叠序列的片段，广 泛应用于基因的快速定向克隆，
实验过程涉及的反 应机理如下： 利用外切酶活性产生单链 3‘ 突出端，促使互 补的末端重叠序列（15-20 bp）退火； 互补末端一旦退火完成，聚合酶活性会沿 3‘延 伸填补退火片段的缺口；
缺口补平后，利用 DNA 连接酶的连接酶活性完 成 DNA 切刻处的修复，形成完整的重组载体。 整个过程只需在 50℃下反应 5-15 min 即可完成，一 次反应可兼容 1~5 个片段的同源重组，内含高保真 DNA 聚合酶和高保真 DNA 连接酶可确保重组准确进 行，连接产物可进行多种化学感受态大肠杆菌的转 化，阳性率接近 100%。
【产品应用】 单片段 / 多片段快速克隆、DNA 定点突变
【操作方法】 1. 重组反应 1) 配制反应体系如下： 组分 重组反应 阳性对照 灭菌水 up to 10 μL up to 10 μL Fast DNA Assembly Mix 5 μL 5 μL 插入片段【1】 Y1+Y2…+Yn μL 1 μL 线性化载体【1】 X μL 1 μL 【1】线性化载体及插入片段的推荐使用量： 插入类型 最适载体使用 量（ng） 最适插入片段使用 量（ng） 单片段重组 0.02 × 克隆载体 碱基对数 0.04 × 插入片段碱 基对数 多片段重组 0.02 × 克隆载体 碱基对数 0.02 × 插入片段碱 基对数 Fast DNA Assembly Mix 2) 重组反应 反应温度为 50℃，其中单片段重组反应 5min 即可，多 片段重组反应需要延长至 15min。
2. 连接产物转化 将克隆用的化学感受态细胞置于冰上解冻。 取 5 - 10 μL 连接产物加入到 100 μL 感受态细胞 中，轻弹管壁混匀 ( 请勿振荡混匀 )，冰上静置 30 min。注意：连接产物转化体积最多不应超 过所用感受态细胞体积的 1/10。 42℃水浴热激 60 sec 后，立即置于冰上冷却 4- 5 min。 加入 900 μL SOC 或 LB 液体培养基 ( 不添加抗 生素 )，37℃摇菌 1 h ( 转速 200 - 250 rpm)。 将相应抗性的 LB 固体培养基平板在 37℃培养 箱中预热。 5000 rpm 离心 5min，弃掉 900 μL 上清。用剩 余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确 抗性的平板上轻轻涂匀。 37℃培养箱中倒置培养 12 - 16 h。
3. 阳性克隆鉴定 菌落 PCR 鉴定；酶切鉴定；测序分析。