【储存条件】 收到本产品后，请立即置于 -20℃保存。从 -20℃取 出 使 用 时， 将 冻 存 的 2× Ultra SYBR Green qPCR Mix 融解，然后轻轻颠倒混匀，待溶液完全均一后再 行使用。如解冻后没有使用，须彻底混匀后重新冷冻。 

【产品简介】 本品是应用嵌合荧光法进行 Real Time PCR 的专用 试剂，可对目标 DNA 进行快速、特异性的定量检测。 优化的预混液可缩短 Real-Time PCR 的反应时间， 适用于标准或快速 PCR 仪。 2× Ultra SYBR Green qPCR Mix 采 用 化 学 修 饰 的 SsoTaq DNA 聚合酶，配合独特的 qPCR Buffer 体系 可确保本产品进行高灵敏的快速 qPCR 反应，qPCR 反应时间可缩短至 1 小时以内。此外，Buffer 中添 加了延伸因子和特异性增强因子，还使得本产品广 泛适用于各类样本的检测，对具有复杂高级结构的 模板、PCR 抑制剂残留较多的模板等也具有非常好 的适用性。同时本产品还具有高扩增效率，高扩增 特异性和宽广的可信范围等特点，在不影响 PCR 效 果的前提下更快获得结果。 

【适用机型】 本品不含用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差 的 ROX Reference Dye，适用于以下荧光定量 PCR 仪： Bio-Rad 品牌： Bio-Rad CFX96 ™，CFX384 ™，iCycler iQ™，iQ™ 5 等； Roche 品牌： LightCycler 480 System； Takara 品牌： Thermal Cycler Dice Real Time System 系列； Eppendorf 品牌： Mastercycler® ep realplex，realplex 2 s； 其 他 不 需 要 添 加 ROX Reference Dye 的 荧 光 定 量 PCR 仪。

 【注意事项】 本品属于化学修饰的热启动酶，95℃预变性满 10 min 方能充分释放 DNA 聚合酶活性。 如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。使 用时请上下颠倒轻轻混匀，请不要使用振荡器进 行混匀，尽量避免出现泡沫，并经瞬时离心后使 用。 2× Ultra SYBR Green qPCR Mix 引 物 纯 度 对 反 应 特 异 性 影 响 很 大， 建 议 使 用 PAGE 级别以上纯化的引物。 20 μL 反 应 体 系 中，cDNA 模 板 的 使 用 量 一 般 小于 100 ng，基因组 DNA 模板量一般小于 50 ng，逆转录产物作为模板时，使用量应不超过 PCR 体系终体积的 10%。

 【操作方法】 1. 反应体系准备 1) 将 2× Ultra SYBR Green qPCR Mix，模板，引 物和 Nuclease Free ddH2O 等试剂在室温下溶解， 上下颠倒混匀后离心至管底。 2) 建议在冰上进行 Real-Time PCR 反应液的配制， 反应体系如下所示。 Add Nuclease-Free ddH2O To 20 μL 2× Ultra SYBR Green qPCR Mix 10 μL Forward Primer ( 10 μM ) ☆ 0.5 μL Reverse Primer ( 10 μM ) ☆ 0.5 μL cDNA 模板☆☆ Optional ☆ 引物终浓度为 0.25 μM 可以在大多数体系中获得良好 的扩增结果。扩增效率不高时，可增加 PCR 反应体系中 的引物浓度；发生非特异扩增时，可适当减少 PCR 反应 体系中的引物浓度。需要进一步优化引物浓度的，可以 在 0.2-0.5 μM 范围内调整。 ☆☆ 如模板类型为未稀释 cDNA 原液，使用体积不应超 过 qPCR 反应总体积的 1/10。 3) 盖上反应管，轻柔混匀。可短暂离心，确保所有 组分均在管底。 2.Real-Time PCR 反应程序设定 建议采用如下反应程序： 阶段 温度 时间 循环 荧光信号采集 预变性 95℃ 10 min 1× 否 PCR 反应 95℃ 5 Sec 40× 否 60℃ 20 Sec ☆☆☆ 是 熔解曲线分析 ☆☆☆ 部分 qPCR 仪器的退火及延伸时间必须设定在 30 Sec 以上时，请以最小值设定即可。 3． 设置好反应程序后，将反应体系置于荧光定 量 PCR 仪中，并立即运行反应程序。