【预期用途】
本试剂盒可用于定性检测人血清或血浆(柠檬酸盐、肝素)中抗巨细胞病毒(CMV)的IgM类抗体。
【检测原理】
特异性抗体的定性免疫酶学测定是基于ELISA(酶联免疫吸附试验)技术。微孔板上包被特定的抗原,以结合样品的相应抗体。洗涤微孔以去除所有未结合的样品材料后,添加酶联物(HRP),与捕获的抗体结合。在第二个洗涤步骤中,未结合的共轭物被去除。通过加入四甲基联苯胺(TMB)底物,得到蓝色反应产物,可以观察到结合结合物形成的免疫复合物。该产品的强度与样品中特异性抗体的数量成正比。加入终止液以终止反应,蓝色变成了黄色。使用酶标仪器读取450/620nm处的吸光度。
【检测步骤】
1)加100µL标准品或质控品和稀释的样品至相应的微孔中,保留A1为空白对照。
2)用提供的封板纸封板。
3)37± 1 °C孵育1小时± 5 分钟。
4)弃掉微孔中的内容物,用稀释的洗涤液冲洗孔3次(每次每孔300µL)。洗涤和吸入的时间间隔应>5s。在吸水纸上用力击打微孔板,以去除残留的液滴。
5)加100µL酶联物至每个微孔中,除了空白孔。
6)室温下(20-25℃)避光孵育30分钟。
7)重复步骤4。
8)加100µL底物液至每个微孔中。
9)在黑暗环境中室温下孵育15分钟。
10)加100µL终止液至每个微孔中。
11)在加入终止液后的30分钟内,用酶标仪读取在450/620nm处的吸光度
【测量方法】
使用空白对照孔,将酶标仪调零。
如果由于技术原因,酶标仪不能使用孔板空白值调零,则从所有其他测量的吸光度值中减去其吸光度值,以获得可靠的结果!
在450nm处测量所有孔的吸光度,并在微孔板布局中记录每个标准/质控和样品的吸光度值。
推荐使用620nm的参考波长进行双色测量。