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一般描述
测序级胰蛋白酶从牛胰腺中分离而得,可作为一种高度纯化且特异性的蛋白酶。测序级胰蛋白酶是一种丝氨酸内肽酶。 它可在碱性氨基酸Arg和Lys的羧基侧对肽键进行特异性的断裂。Arg和Lys的酰胺和酯键也被切割。
特异性
测序级胰蛋白酶的参数是通过氧化的胰岛素B-链 (胰岛素Box)作为底物而被确认的。高浓度的测序级胰蛋白酶(1份重量的酶及18份重要的胰岛素Box)孵育18小时后以检测胰凝乳蛋白酶杂质的存在。
参数(HPC,与胰岛素Box):
1小时后断裂:≥90%;
18小时后非特异性断裂:≤10%;
应用
测序级胰蛋白酶可用于消化溶液中、凝胶中或印迹膜上的蛋白。
该酶可用于蛋白质结构分析、胰蛋白酶比对、指纹分析、序列分析和易位研究。 测序级胰蛋白酶可从纯化的糖蛋白上生成糖肽并适合于消化聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白。
质量
纯度:不含在反相HPLC中可能干扰肽分离的杂质。
制备说明
稳定剂:胰蛋白酶在4 M是稳定的。
工作浓度:蛋白重要的1/100至1/20(溶液中);1-5 μg/100 μl (用于胶内消化)
储存条件(工作溶液):在0.01% (v/v)三氟乙酸或1 mM HCl中的溶液,如果储存在2到8°C,可最多使用一周。在中性至微碱性pH值的溶液中蛋白的孵育可能会发生部分的自溶。对于此应用,Roche推荐测序级的改良胰蛋白酶。
重悬
用酸进行重组对于溶液的稳定性是必需的:推荐0.01% TFA (v/v)、1 mM HCl或0.1%乙酸。