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SMD1168感受态细胞(化转),限北京
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  • 货号 CC120-10×100μL
  • 品牌 Coolaber ( 经销商 )
  • CAS号
  • 规格/包装 10×100μL
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SMD1168是毕赤酵母菌株,属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的,因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染,往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素,来抑制细菌菌的污染和生长。SMD1168毕赤酵母适宜的生长温度是28-30℃,一般使用30℃培养,温度超过32℃可能导致细胞的死亡。 SMD1168毕赤酵母是His营养缺陷型菌株,在缺乏组氨酸SC minimal media中无法生长。SMD1168的配套载体是含有His4基因的酵母表达载体,例如pPIC9K, pPIC3.5K。SMD1168基因组中的Pep4基因发生突变,造成蛋白水解酶A活性的丧失,可以保护表达产物免受降解,促进表达量的提高。 使用方法: 1. 取0.1-5 μg质粒DNA(线性化质粒加入量5-50 μg)和10 μL预变性Carrier DNA,加入到未融化的100-200 μL感受态细胞上,置于30 ℃水浴,每隔15 S颠倒混匀,直至感受态细胞刚好完全融化(融化后及时取出)。 2. 加入1.4 mL B2溶液颠倒混匀。30 ℃水浴60 min,每隔20 min颠倒混匀 3. 3,000 rpm离心3 min弃上清留菌体沉淀,加入1 mL B3溶液重悬菌体。 4. 3,000 rpm 离心3 min 弃上清留菌体沉淀,加入100 μL B3溶液重悬菌体。 5. 将100 μL菌液全部涂布到相应的平板培养基,30 ℃恒温培养3-5天,直至平板出现酵母克隆。 注意事项: 1. 初次使用Carrier DNA,请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20 ℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻Carrier DNA。反复冻融3-5次后需重新变性Carrier DNA。 2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。 4. 毕赤酵母适宜的生长温度是28至30℃,温度超过32℃对蛋白的表达是有害的,并可能导致细胞的死亡。
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