X-33是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。毕赤酵母适宜的生长温度是28至30 ℃，温度超过32 ℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。 X-33毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒，例如pPICZ A,B,C系列的载体。在筛选X-33重组转化菌株时，Zeocin抗生素的工作浓度是100 ug/ml。 使用方法： 1. 取0.1-5 μg质粒DNA（线性化质粒加入量5-50 μg）和10 μL预变性Carrier DNA，加入到未融化的100-200 μL感受态细胞上，置于30 ℃水浴，每隔15 S颠倒混匀，直至感受态细胞刚好完全融化（融化后及时取出）。 2. 加入1.4 mL B2溶液颠倒混匀。30 ℃水浴60 min，每隔20 min颠倒混匀 3. 3,000 rpm离心3 min弃上清留菌体沉淀，加入1 mL B3溶液重悬菌体。 4. 3,000 rpm 离心3 min 弃上清留菌体沉淀，加入100 μL B3溶液重悬菌体。 5. 将100 μL菌液全部涂布到相应的平板培养基，30 ℃恒温培养3-5天，直至平板出现酵母克隆。 注意事项： 1. 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20 ℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻Carrier DNA。反复冻融3-5次后需重新变性Carrier DNA。 2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。 4. 毕赤酵母适宜的生长温度是28至30 ℃，温度超过32 ℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。