应用生物系统™ TaqMan™ Advanced miRNA cDNA 合成试剂盒使用通用型逆转录 (RT) 化学试剂盒制备 cDNA 模板，与 TaqMan™ Advanced miRNA 测定一起用于检测和定量生物样本中的成熟 miRNA。 TaqMan Advanced miRNA 工作流程的特点包括： •灵敏度：高灵敏度可以定量低检测低表达的 miRNA 靶标，尤其是在血浆、血清和组织等生物流体中 •灵活性：通用 RT 化学可为样本中存在的所有 miRNA 生成通用的 cDNA 模板，从而使研究设计具有灵活性 •节省样本：仅需2 μL 血浆/血清样本输入，即可生成足够的 cDNA 用于 600 次 qPCR 反应（20 μL）或 1200 次 qPCR 反应（10 μL） •特异性：5’个连接步骤允许沿着整个 miRNA 序列中进行单碱基对区分，包括5’末端难以检测的错配 •金标准 TaqMan 化学：该试剂盒设计用于与 qPCR 的 TaqMan ®Advanced miRNA 测定结合使用，该方法利用了赛默飞世尔科技行业领先的生物信息学测定设计流程和验证系统，有助于确保高特异性和最小的交叉反应性，即使对于密切相关的 miRNA 系列也是如此。 TaqMan Advanced miRNA cDNA 合成试剂盒使用3个 poly-A 拖尾和适配器序列的5个连接用于逆转录前延伸样本中存在于末端的成熟 miRNA。通用 RT 引物识别存在于成熟 miRNA 的 5’ 和 3’ 延伸端上的通用序列。样本中所有成熟 miRNA 都被逆转录为 cDNA。 为了改善低表达 miRNA 靶标的检测，然后使用通用 miR-Amp 引物和 miR-Amp 预混液扩增 cDNA，以均匀增加各个靶标 cDNA 的量，并保持相对差异表达水平。与传统预扩增不同、通用 miR-Amp 引物可识别添加至 5’ 和 3’ 端所有成熟 miRNA 中的通用序列，确保不存在扩增偏倚。 注：TaqMan Advanced miRNA cDNA 合成试剂盒与用于 qPCK 的第一代 TaqMan MicroRNA 测定不兼容。有关使用 miRNA 特异性 RT 引物逆转录 miRNA 靶标的信息，请参阅 TaqMan™ MicroRNA 逆转录试剂盒。