概述：SUMO蛋白酶 (SUMO Protease)，也称ULP蛋白酶，是一种高活性的半胱氨酸蛋白酶^（1），它能够高效地把SUMO (Small Ubiquitin-like Modifier) 从融合蛋白上切割下来。不同于大多数蛋白酶 (识别位点为氨基酸序列)，SUMO蛋白酶识别SUMO蛋白的三级结构，所以具极高的特异性^(2,3)。SUMO融合蛋白经SUMO蛋白酶切割后，无末端残留残基，可以获得具有自然氮末端的目标蛋白  (氮末端为脯氨酸的除外)⁽⁴⁾。SUMO蛋白酶的最适反应温度为30°C，可以在较为宽范围的反应体系 (温度4-30°C，pH 5.5-9.5) 中保持活性，并且对部分蛋白变性剂有一定的耐受能力⁽⁴⁾ (详见下文)。本公司的Sumo蛋白酶具有多聚组氨酸标签 (polyhistidine tag)，便于融合蛋白切割后的亲和层析纯化。

来源：重组E. coli菌株，含有酿酒酵母Ulp1基因片段。

酶活性单位定义：在30°C条件下反应1小时，切割100 µg的反应底物 (SUMO-eGFP) 达90％以上所需的酶量定义为一个活性单位。

溶液成分：

SUMO蛋白酶贮存液:

25 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25°C)

1% IGEPAL  CA-630 (NP-40) ®

250 mM NaCl

50 μM DTT

50% (v/v) 甘油

10× SUMO Protease Buffer (Salt plus):

500 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25°C)

2% IGEPAL  CA-630 (NP-40) ®

1.5 M NaCl

10 mM DTT

10× SUMO Protease Buffer (Salt free):

500 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25°C)

2% IGEPAL  CA-630 (NP-40) ®

10 mM DTT

推荐反应体系：

[#]：1 U Sumo蛋白酶在30°C条件下反应1小时，可以切割大于90 µg的反应底物 (SUMO-eGFP) ，但对于其它底物的切割效率可能会有差异，初次反应推荐使用1 U的Sumo蛋白酶切割10 μg底物。

各温度下的参考反应时间：

4°C反应，     15-16小时

16°C反应，        4小时

25°C反应，      1.5小时

30°C反应，        1小时

贮存条件：长期贮存于-80°C，或解冻后保存于-20°C，避免反复冻融，可稳定保持活性1年以上。

注意事项：

1. 常用化学品对SUMO蛋白活性的影响⁽⁴⁾：

[*]对于大部分融合蛋白，SUMO蛋白酶反应体系中NaCl的推荐浓度为150 mM。然而，根据实际情况可在100 mM~300 mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。请务必考虑到酶储液中的盐浓度和底物中的盐浓度。

2. 当融合蛋白中SUMO蛋白碳末端甘氨酸后的残基为脯氨酸时，SUMO蛋白酶无法切割⁽⁴⁾。

参考文献：

1. Li, S.J. and Hochstrasser, M. (1999) Nature, 398, 246-251.

2. Müller, S., Hoege, C., Pyrowolakis, G. and Jentsch, S. (2001) Nature Rev. Mol.Cell Biol., 2, 202-210.

3. Mossessova, E. and Lima, C.D. (2000) Mol. Cell, 5, 865-876.

4. Panavas, T., Sanders, C., and Butt, T.R. (2009) Methods Mol. Biol., 497, 303-317.