Corning® Matrigel®低生长因子(GFR)是一种可溶性的基底膜制剂，这种基质是从Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)小鼠肉瘤，一种富含细胞外基质蛋白的肿瘤中抽提出来的。它的主要成分是层粘连蛋白，胶原蛋白Ⅳ、硫酸乙酰肝素蛋白多糖和巢蛋白。低生长因子也含有转化生长因子β、表皮生长因子、类胰岛素生长因子、成纤维细胞生长因子、组织纤溶酶原激活物和在EHS 肿瘤中自然出现的其他生长因子。

Corning® Matrigel®低生长因子的研制是为了满足那些需要纯化的重组基底膜制剂和比Corning® Matrigel®基质更具有特点的制剂的研究者。用于制备这一产品的方法能有效地减少除转化生长因子β 外多种生长因子的水平，在纯化过程中转化生长因子β 可能被胶原蛋白Ⅳ结合和/或以潜伏的形式与主要成分分离。通过该方法，虽然硫酸类肝素蛋白多糖的水平下降了40-50%，但是主要成分：层粘连蛋白、胶原蛋白Ⅳ和巢蛋白是守恒的。下表显示了相比于典型的基质中生长因子的值。

应用：

1、该基质对正常和变换的锚定依赖性，上皮样细胞和其他细胞类型的附着和分化是有效的。这些细胞类型包括神经元、肝细胞、支持细胞、小鸡晶状体上皮细胞和血管内皮细胞。

2、在成年大鼠肝细胞、血管内皮细胞以及小鼠和人乳腺上皮细胞的三维细胞培养中，该基质胶会影响基因的表达。

3、该基质胶是几种类型肿瘤细胞侵袭实验的基础，支持体内末梢神经再生，并提供体外和体内血管再生研究的必需底物。

4、也支持免疫抑制小鼠中人类肿瘤的增殖。

5、能用于未分选乳腺细胞的移植，以及分选的上皮细胞亚群嵌入康宁基底膜基质。

6、也被用作为癌症干细胞模型并被证明能在体内增强肿瘤生长速率。

来源：

Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)小鼠肿瘤

制剂：

含有50 μg/mL 庆大霉素的达尔伯克改良伊格尔培养基。Corning® Matrigel®基质低生长因子适合所有的培养基。

储存：

储存在-20°C 时是稳定的。应该通过分装并使用一次性分装物来最小化产品的冻融。在-20°C 冰箱中储存分装物直到准备使用。请不要储存在无霜冰箱中。请保持产品的冻结。

有效日期：

   Corning® Matrigel®低生长因子的有效日期是批次特异的，您可以在产品的分析证明书中找到。

警告：

因为Corning® Matrigel®基质低生长因子在10°C 以上会开始凝胶化，所以极其重要的是基质和所有接触的培养皿或培养基都应该预冷。在实验的全部过程中请保持基质处于冰上。

重构和使用：

在Corning® Matrigel®基质低生长因子小瓶冻融的过程中可能会发生颜色的变化，由于CO2和碳酸氢盐缓冲液以及酚红的作用，颜色会从淡黄色变化到深红色。颜色的变化是正常的，不会影响产品的功效，颜色将会在5%CO2 平衡下消失。

1、请将基质全程保持在冰上

2、请将小瓶淹没在冰中并放置在4°C 冰箱里过夜解冻。

3、一旦基质低被解冻，请涡旋小瓶以确保材料的均匀分散。

4、请使用无菌技术处理，请将解冻的基质放置在无菌的区域，在小瓶的顶部喷洒70%的乙醇并风干。

5、使用预冷的移液管轻柔的吸取康宁基底膜基质低生长因子以确保其均匀性。

6、分装康宁基底膜基质低生长因子到离心管中，每当基质堵塞吸头和/或移液管测量不精确时请更换吸头。

7、如果将材料放置在4°C 的冰上24-48 个小时，凝胶化的基质可能会被重新水化。

包被涂层方法：

康宁基底膜基质低生长因子可以以几种方式使用：

1、薄层凝胶法适用于在凝胶顶部接种细胞

2、厚层凝胶法允许您在三维基质内培养细胞

3、薄层包被法(不凝胶化)给您提供了复杂的蛋白质层，您可以在其上培养细胞。

您的选择基于您想要实现的最终结果，无论是细胞生长、附着还是分化。

注意：

在康宁支持网页上发布了具体的应用程序*。康宁基底膜基质产品的蛋白质浓度是批次特异的并提供在分析证明书上。通过计算需要的特定蛋白浓度(mg/mL)获得了稀释康宁基底膜基质产品的一致结果。为了维持凝胶化的一致性，我们推荐不要将康宁基底膜基质稀释到少于3 mg/mL。请使用冰冷的无血清培养基来稀释康宁基底膜基质。通过在冰上移液管上下吸液或涡旋小瓶来混合。

薄层凝胶法

1. 依照推荐的方法解冻Corning® Matrigel®基质低生长因子。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质低生长因子混合至均匀。

2. 将培养板放置在冰上，以50 μl/cm2 向生长表面加入康宁基底膜基质低生长因子。

3. 将培养板放置在37°C，30 分钟。

4. 如果有必要的话，请在使用无血清培养基轻柔漂洗前吸出未结合的材料。请确保移液器的吸头不要刮擦包被的表面。培养板现在可以使用了。

厚层凝胶法

1. 依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质低生长因子。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质低生长因子混合至均匀。

2. 将培养板放置在冰上。向康宁基底膜基质低生长因子中加入细胞并使用预冷的移液管悬浮。以150-200 μl/cm2 向生长表面加入康宁基底膜基质低生长因子。

3. 将培养板放置在37 °C ，30 分钟。现在可以添加培养基了。细胞也可以培养在这一凝胶的顶部。

薄层包被法

1. 依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质低生长因子。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质低生长因子混合至均匀。

2. 使用无血清培养基将康宁基底膜基质低生长因子稀释到需要的浓度。对于您的应用程序，您应该完成以经验为主的研究来确定您的最适包被浓度。

3. 向被包被的容器中加入稀释的康宁基底膜基质低生长 因子。加入的量应该足以容易地覆盖整个生长表面。在室温下培养1 个小时。

4. 吸出未结合的材料并使用无血清培养基轻柔地漂洗。培养板现在可以使用了。

细胞复苏：

康宁中性蛋白酶(货号354235)，康宁细胞复苏溶液(货号354253)。

使用康宁细胞复苏溶液在冰上7 小时内解聚康宁基底膜基质低生长因子能够实现将生长在康宁基底膜基质低生长因子上的细胞最有效地复苏，或者使用中性蛋白酶，中性蛋白酶作为一种金属酶可以分散连续培养的细胞。