
样品制备:
1) 收集血清或血浆样本并将其保存在冰上。 如果血清或血浆样本处于冷冻状态,请在室温下完全解冻样品后,迅速放置冰上备用。
2) 离心样品:将 20μL-1mL 样品放置于 1.5 mL EP 管中,2000 ×g ,10 min,然后 10000 ×g ,
4℃,30 min,(或者 4000rpm, 4℃,30min)离心后丢弃血细胞和细胞碎片,收集上层上清。重要提示:如果离心后的血清或血浆样本混浊,请在将样品装入 GETTM 提取柱之前, 使用孔径为 0.45μm 的 Millipore 针式滤器过滤收集的样本。防止样本中混浊沉淀物在后续操作中堵塞外泌体提取柱。
外泌体分离:
1) 柱预处理:将 100μL 预处理缓冲液(PB)加入到 GETTM 柱中,以 9,000×g 离心 1min。
2) 平衡:向 GETTM 柱中加入 20μL 平衡缓冲液(EB),以 9,000×g 离心 1min。
3) 样品加载:将清澈的血清/血浆(每个负载约 500μL)加载到 GETTM 柱,以 9,000xg 离心 1 分钟。 重复加载样品直至完成。
4) 释放:将 10μL 释放缓冲液(RB)均匀加入 GETTM 柱中,用 tip 头轻轻冲洗柱膜一次, 然后吸出 RB。请保持柱膜湿润。5)收集:将 GETTM 柱转移到新的收集管中,向 GETTM 柱中加入 10-30μL 收集缓冲液(CB),用 tip 头反复充分冲洗柱膜后,室温孵育 1-2min,并以 9,000 x g 离心 3min。 收集过滤的液体(外泌体)。
6)向收集的外泌体溶液中加入 10μL 外泌体稳定剂并充分混合后,即获得可用科学研究的高纯度的外泌体(外泌体可在 4°C 下稳定储存 1 周,在-80°C 下稳定储存 3 个月)。